Фактор транскрипции щитовидной железы (TTF1) представляет собой ядерный белок, входящий в семейство генов Nkx2. Экспрессия TTF1 в условиях нормы типично обнаруживается в эпителии щитовидной железы и легких, где этот фактор играет значимую морфогенетическую роль. Специфичность экспрессии TTF1 при злокачественных опухолях, происходящих из эпителия легких и щитовидной железы, стала надежным инструментом в повседневной диагностической работе патологоанатомов [1]. Вместе с этим появились исследования, направленные на оценку экспрессии TTF1 в опухолевых клетках лимфом. Так, были опубликованы сообщения об аберрантной экспрессии TTF1 (клон SPT24) в субстрате диффузной B-клеточной крупноклеточной лимфомы, обнаруживаемой в 3,8% случаев [2]. Не менее интересные результаты получены в более позднем исследовании T-клеточных лимфом на предмет экспрессии TTF1, опубликованном в 2021 г. Авторы, используя два различных клона антител, обнаружили экспрессию TTF1 в 16 и 5% случаев периферических T-клеточных лимфом при использовании клонов SPT24 и 8G7G3/I соответственно. Среди случаев, в которых клетки опухоли экспрессировали TTF1, были ангиоиммунобластная T-клеточная лимфома (до 16%), T-клеточный лейкоз/лимфома взрослых (25%). Экспрессия обнаруживалась в значительном числе клеток опухоли (30 — 100% субстрата). В своей работе исследователи не выявили ни одного случая экспрессии TTF1 клетками опухоли при анапластической крупноклеточной лимфоме (ALK-позитивной и ALK-негативной), экстранодальной NK/T-клеточной лимфоме назального типа, мономорфной эпителиотропной кишечной T-клеточной лимфоме, периферической T-клеточной лимфоме неспецифицированной [3]. Следует отметить, что в свое исследование авторы включили только 4 случая анапластической крупноклеточной лимфомы (2 случая ALK-позитивной и 2 случая ALK-негативной). Вместе с этим известно, что опухолевый субстрат анапластической крупноклеточной лимфомы может имитировать морфологические характеристики карцином, в том числе метастатического характера.

В связи с этим нам представилось интересным оценить вероятность аберрантной экспрессии TTF1 в клетках анапластической крупноклеточной лимфомы на большем количестве случаев, что стало целью настоящего исследования.

Материал и методы

В исследование включены случаи диагностики анапластической крупноклеточной лимфомы независимо от ALK-статуса, которые были выявлены в КГУБЗ «Красноярское краевое патолого-анатомическое бюро» и КГБУЗ «Краевая клиническая больница им. профессора С.И. Сергеева» за период с 2008 по 2024 г. Количество случаев, доступных для исследования и имеющих архивные стекла и блоки, составило 47. Все случаи подлежали повторному пересмотру, и диагноз был подтвержден независимо тремя врачами-патологоанатомами, специализирующимися в области гематопатологии из числа авторов исследования. В рамках исследования изготовлены дополнительные гистологические препараты, в отношении которых проведена дополнительная реакция с антителом TTF1 (SP141, Ventana Medical System, США). Постановку реакции проводили на платформе Ventana BenchMark ULTRA, используя систему детекции UltraView и первичное антитело TTF1 (SP141). Предварительную обработку клеток выполняли с помощью буфера для демаскировки с высоким pH (Ultra CC1) в течение 64 мин при температуре 95 °C. Инкубация антитела составила 24 мин при 36 °C. В 4 случаях применяли платформу BondMax с антителом TTF1 (SPT24).

В исследовании учитывали клинические данные пациентов, включающие возраст, пол, распространенность и локализацию опухолевого процесса, морфологические характеристики опухолевого субстрата и иммунофенотип клеток опухоли. При оценке иммунофенотипа опухолевых клеток оценивали экспрессию следующих маркеров: CD2 (MRQ-11), CD3 (2GV6), CD4 (SP35), CD5 (SP19), CD7 (SP94), CD8 (SP57), TIA-1 (EP243), Granzim-B (poly), CD30 (Ber-H2), CD246 (ALK-1), CD15 (MMA), MUM1 (MUM1p), CD20 (L26), PAX-5 (SP34), BOB.1 (SP92), Oct-2 (MRQ-2), CD45LCA (2B11&PD7/26), EMA (E29). В части случаев проводили CISH-исследование на предмет обнаружения генома EBV (EBER).

Все процедуры, выполненные в исследовании, соответствуют стандартам этического комитета организации, Хельсинкской декларации 1964 г. и ее последующим изменениям. Статистический анализ осуществлен методами вариационной статистики для непараметрических величин с использованием программы Statistica 10, StatSoft. Расчетные значения приведены в медианах с указанием 25 и 75 %о .

Результаты

В исследуемую группу вошли 47 пациентов с морфологически подтвержденной анапластической крупноклеточной лимфомой (21 (40%) случай ALK-позитивной и 26 (60%) случаев ALK-негативной по иммуногистохимически определяемой экспрессии CD246 (ALK-1)). Среди обследуемых пациентов преобладали мужчины — 27 (64%) против 15 (36%) женщин. Распространенность и локализация опухолевого процесса представлены в табл. 1.

Таблица 1. Распространенность и локализация опухолевого процесса

Примечание. ALK+ALCL — ALK-позитивная анапластическая крупноклеточная лимфома; ALK–ALCL — ALK-негативная анапластическая крупноклеточная лимфома.

Во всех случаях субстрат опухоли представлен диффузным пролифератом крупных атипичных лимфоидных клеток, многие из которых имели многодольчатое ядро, множество ядрышек, умеренно выраженную цитоплазму. Не обнаружено особых морфологических характеристик, отличающих случаи TTF1-позитивной опухоли от TTF1-негативной.

При иммуногистохимическом исследовании клетки опухоли мономорфно экспрессировали CD30 и обнаруживали T-клеточный иммунофенотип с экспрессией различной комбинации T-клеточных маркеров, примененных в исследовании. Сравнительный анализ экспрессии линейных маркеров T-клеточной дифференцировки не выявил межгрупповых различий (p<0,05). Ядерная экспрессия TTF1 обнаружена в 5 (10,6%) случаях из 47. Экспрессия TTF1 клетками опухоли выявлялась исключительно в случаях нодальной ALK-негативной анапластической крупноклеточной лимфомы. Экспрессия TTF1 обнаруживалась в различном числе клеток опухоли с градиентом экспрессии от умеренной до интенсивной (табл. 2). Малое число случаев наблюдения не позволяет достоверно судить об особенностях возрастно-половой структуры при экспрессии опухолевыми клетками TTF1. Однако можно отметить, что в исследуемой группе TTF1-позитивных случаев медиана возраста составила 47 лет (Q₂₅ — 28; Q₇₅ — 67), в группе TTF1-негативных случаев показатель был 49 лет (Q₂₅ — 30; Q₇₅ — 71).

Таблица 2. Иммуногистохимические характеристики клеток опухоли при TTF1-позитивной анапластической крупноклеточной лимфоме

Примечание: н/д — нет данных.

В одном из случаев 100% клеток опухоли интенсивно ядерно экспрессировали TTF1 (рис. 1), в остальных позитивно окрашенные клетки располагались дискретно или формировали рыхлые скопления. В последних наблюдениях TTF1-экспрессирующие опухолевые клетки были единичны или составляли не более 15% от субстрата опухоли (рис. 2).

Рис. 1. ALK-негативная анапластическая крупноклеточная лимфома с экспрессией TTF1.

а — рисунок гистологического строения лимфатического узла нарушен за счет диффузной пролиферации крупных атипичных лимфоидных клеток с полиморфными ядрами; б — клетки опухоли экспрессируют CD30; в — экспрессия клетками опухоли CD3; г — интенсивная экспрессия TTF1 большинством опухолевых клеток; а — окраска гематоксилином и эозином; б–г — иммуногистохимическая реакция. Ув. ×200.

Рис. 2. ALK-негативная анапластическая крупноклеточная лимфома с экспрессией TTF1 единичными клетками.

а — рисунок гистологического строения лимфатического узла стерт за счет диффузного пролиферата атипичных лимфоидных клеток крупных размеров с полиморфными ядрами; б — клетки опухоли диффузно экспрессируют CD30; в — экспрессия клетками опухоли CD4; г — интенсивная экспрессия TTF1 единичными клетками опухоли. а — окраска гематоксилином и эозином; б–г — иммуногистохимическая реакция. Ув. ×200.

Для соотнесения T-клеточного фенотипа клеток опухоли и экспрессии TTF1 дополнительно выполнено иммуногистохимическое исследование с двойной хромогенной меткой (рис. 3).

Рис. 3. ALK-негативная анапластическая крупноклеточная лимфома с экспрессией TTF1 большей частью клеток опухоли.

Результат иммуногистохимического исследования с двойной хромогенной меткой: CD3 — красная; TTF1 — коричневая. Ув. ×400.

Обсуждение

Проведенное исследование позволило выявить случаи анапластической крупноклеточной лимфомы, в которых опухолевые клетки экспрессируют TTF1. Исследование выполнено на ограниченном количестве случаев (47), в 5 (10,6%) из которых клетки опухоли аберрантно экспрессировали TTF1. Все случаи относились к субстрату ALK-негативной анапластической крупноклеточной лимфомы с нодальным поражением и наблюдались у пациентов с медианой возраста 66 лет преимущественно мужского пола (4 против 1).

Обнаруженные случаи анапластической крупноклеточной лимфомы характеризовались типичной для данной опухоли морфологией, гетерогенной утратой линейных T-клеточных маркеров, нодальным характером поражения и не экспрессировали ALK. Экспрессия TTF1 обнаруживалась в случае поражения шейных (2), надключичных (2) и подмышечных (1) лимфатических узлов.

Экспрессия TTF1 в практической патологической анатомии рассматривается как один из надежных критериев диагностики опухолей легких и щитовидной железы [4, 5]. Особенно полезным представляется применение антитела к TTF1 при исследовании лимфатических узлов при метастатическом процессе без известного первичного очага.

Вместе с этим опубликованы данные, указывающие на экспрессию TTF1 в клетках лимфом. Среди них можно выделить работы [2, 3], обнаружившие TTF1-позитивные клетки лимфомы при диффузной B-клеточной крупноклеточной лимфоме, ангиоиммунобластной T-клеточной лимфоме и T-клеточном лейкозе/лимфоме взрослых. Авторы, проводившие оценку аберрантной экспрессии TTF1 в периферических T-клеточных лимфомах, не обнаружили случаев позитивности при анапластической крупноклеточной лимфоме, что может быть обусловлено ограниченным числом случаев, а также клонами антител, отличавшихся от использованных в нашем исследовании.

Проведенный информационный поиск, не установил работ, описывающих экспрессию TTF1 при анапластической крупноклеточной лимфоме. Вместе с этим такое наблюдение представляется интересным с практической точки зрения. Клетки опухоли при анапластической крупноклеточной лимфоме, располагаясь в виде кластеров (часто в синусах лимфатических узлов) или плотного диффузного пролиферата, в силу своих цитологических характеристик могут имитировать метастатический процесс. Особые сложности могут возникнуть в случае, когда клетки наряду с экспрессией TTF1 теряют экспрессию CD45 и целого ряда линейных T-клеточных маркеров, что нередко наблюдается при анапластической крупноклеточной лимфоме. Дополнительно усложнить диагностику могут случаи, в которых у пациента ранее была диагностирована аденокарцинома легкого или карцинома щитовидной железы. Экспрессия TTF1 при перекрестных морфологических характеристиках может быть ошибочно расценена как метастатическое поражение.

Подводя итог проведенного исследования, можно сделать следующий вывод. Аберрантная экспрессия TTF1 является редким феноменом при анапластической крупноклеточной лимфоме. Вместе с этим аберрантная экспрессия TTF1 в субстрате анапластической крупноклеточной лимфомы потенциально может привести к ошибочной диагностике метастатического процесса особенно при интенсивной диффузной экспрессии маркера.

Настоящее исследование выполнено на ограниченном объеме материала и может не отражать распространенность феномена в популяции. Также остаются неясными причина аберрантной экспрессии TTF1 при анапластической крупноклеточной лимфоме, равно как и ее клиническое значение.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования — Хоржевский В.А., Алымова Е.В.

Сбор и обработка материала — Хоржевский В.А., Гаппоев С.В., Канин Е.С., Вершинин И.В.

Статистическая обработка — Козырева А.А.

Написание текста — Хоржевский В.А., Гаппоев С.В.

Редактирование — Алымова Е.В.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.