Божченко Я.А.

ФГБУ «Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина» Минздрава России, Российская Федерация, 115478 Москва, Каширское шоссе, 24

Вишневская Я.В.

ФГБУ «Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина» Минздрава России, Российская Федерация, 115478 Москва, Каширское шоссе, 24

Покатаев И.А.

ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия

Кокосадзе Н.В.

Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Демидов Л.В.

НИИ клинической онкологии РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН

Влияние соотношения CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов в перитуморальной зоне первичной меланомы кожи на прогноз течения заболевания

Журнал: Архив патологии. 2016;78(4): 27-31

Просмотров : 1490

Загрузок : 765

Как цитировать

Божченко Я. А., Вишневская Я. В., Покатаев И. А., Кокосадзе Н. В., Демидов Л. В. Влияние соотношения CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов в перитуморальной зоне первичной меланомы кожи на прогноз течения заболевания. Архив патологии. 2016;78(4):27-31. https://doi.org/10.17116/patol201678427-31

Авторы:

Божченко Я.А.

ФГБУ «Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина» Минздрава России, Российская Федерация, 115478 Москва, Каширское шоссе, 24

Все авторы (5)

Состояние иммунной системы - один из факторов, определяющих динамику злокачественного процесса [1]. Исследования последних лет показали, что клетки иммунной системы являются частью микроокружения опухоли и играют определяющую, но в то же время неоднозначную роль в прогрессировании опухолевого процесса и выживаемости онкологических больных [1-4].

Меланома кожи (МК) - злокачественная опухоль, с характерными гистологическими особенностями, одной из которых является лимфоцитарная инфильтрация (ЛИО) [5]. Лимфоциты, инфильтрирующие первичную меланому кожи (ПМК), отличаются иммунофенотипическими особенностями и разнонаправленностью воздействия на опухоль. Так, CD8 Т-лимфоциты оказывают цитотоксическое воздействие на опухолевые клетки, тогда как регуляторные Т-лимфоциты, экспрессирующие FoxP3, подавляют функции CD8 Т-лимфоцитов, способствуя ускользанию опухоли из-под иммунологического контроля [6, 7].

Изучение соотношения этих двух субпопуляций лимфоцитов в опухолевой ткани при аденокарциноме желудка, колоректальном, гепатоцеллюлярном раке, плоскоклеточном раке кожи (ПРК) дало неоднозначные результаты [8-11]. У больных колоректальным раком высокий индекс соотношения CD8+/Foxp3+ Т-лимфоцитов в ткани опухоли показал положительную корреляцию с отдаленной безрецидивной выживаемостью [8]. В то же время при аденокарциноме желудка и гепатоцеллюлярном раке высокое соотношение CD8+/Foxp3+ Т-лимфоцитов в опухолевой ткани являлось независимым негативным прогностическим фактором в отношении общей и безрецидивной выживаемости больных [9, 10]. Высокий индекс соотношения CD8+/Foxp3+ Т-лимфоцитов в ПРК имел положительную корреляцию со степенью дифференцировки опухоли [11]. При исследовании лимфоцитов, инфильтрирующих ПМК, с помощью мультиспектрального иммунофлюоресцентного анализа 36 случаев МК выявлено, что высокое соотношение CD8+/Foxp3+ Т-лимфоцитов является статистически достоверным фактором благоприятного прогноза течения заболевания [12]. Таким образом, изучение соотношения субпопуляций CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов в инфильтрате ПМК имеет актуальное значение и требует дополнительных исследований.

Цель настоящей работы - изучение корреляции индекса соотношения субпопуляций CD8/Foxp3 Т-лимфоцитов, инфильтрирующих ПМК, с основными клинико-морфологическими факторами прогноза течения заболевания.

Материал и методы

Исследование выполнено на гистологическом материале, полученном от 180 больных с диагнозом МК, оперированных в ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России за период 2003-2007 гг. Диагноз М.К. подтвержден данными гистологического исследования препаратов, по которым также оценивалась общая ЛИО в перитуморальной зоне. Иммуногистохимическое исследование выполняли на серийных депарафинизированных срезах опухолевой ткани с помощью биотин-стрептавидинового иммунопероксидазного метода с FoxP3 и CD8 моноклональными антителами (табл. 1).

Таблица 1. Основные характеристики антител, использованных в проводимом исследовании

Срезы толщиной 3-5 мкм депарафинизировали и регидратировали по стандартной схеме. Для демаскировки антигенов проводили предварительную обработку депарафинизированных срезов на водяной бане при температуре 95 °C в течение 40 мин с использованием цитратного буфера, рН 6,0 («Dako»). Срезы инкубировали с первичными антителами в течение 1 ч при комнатной температуре. В качестве вторичных антител и пероксидазного комплекса использовали стандартный набор реагентов LSAB+ Kit или систему детекции SuperSensitive Polymer-HRP («BioGenex»). Для визуализации реакции применялся раствор диаминобензидина DAB+ («Dako»). Ядра клеток докрашивали гематоксилином Майера (рисунок).

Иммуногистохимическое исследование лимфоцитарной инфильтрации при меланоме кожи. а - с антителами к CD8 Т-лимфоцитам, ×40; б - с антителами к FoxP3 Т-регуляторным лимфоцитам, ×40.

Оценку ЛИО ПМК проводили гистологически путем подсчета положительно окрашенных лимфоцитов в 10 полях зрения (×40). Вычисляли среднее количество положительно окрашенных клеток в 1 поле зрения и соотношение CD8/FoxP3 положительно окрашенных клеток путем деления их средних значений.

Статистическую обработку материалов проводили с использованием программ Microsoft Excel, Statistica software release 8.0 («Stat Soft Inc.»), за величину уровня статистической значимости принимали р<0,05.

Результаты

В зависимости от значения индекса соотношения CD8/FoxP3 положительно окрашенных клеток все больные были разделены на 4 группы (табл. 2).

Таблица 2. Распределение больных по индексу соотношения CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов в ПМК

У больных ПМК наиболее часто индекс CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов был более 3 (42,2%), наименее часто - от 1 до 1,5 (14,4%). Также отмечалась тенденция к увеличению количества больных в группах наблюдения с увеличением индекса соотношения CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов.

Сравнительная клинико-морфологическая характеристика больных, распределенных по четырем группам, представлена в табл. 3.

Таблица 3. Сравнительная клинико-морфологическая характеристика больных в четырех группах (CD8/FoxP3)

Если в 1-й группе наблюдения преобладали больные мужского пола (62% случаев), то при увеличении индекса соотношения CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов возникает тенденция к равному распределению больных по полу во 2-й и 3-й группах с последующим преобладанием женщин в 4-й группе (60,5% случаев). В то же время распределение больных по полу не имело статистической значимости (р=0,22).

Получены статистически значимые различия между группами по стадиям заболевания. Больные в I стадии заболевания отсутствовали в 1-й группе, а во 2, 3 и 4-й группах отмечалась тенденция к увеличению их количества с увеличением индекса соотношения CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов (5,9, 9,0, 31,6% соответственно). При этом во всех группах больные во II стадии заболевания составили более 50% случаев.

По таким морфологическим признакам, как толщина опухоли по Бреслоу и тип роста опухоли, достоверных статистических различий между группами наблюдения выявлено не было. В то же время такие особенности опухоли, как наличие изъязвления, участков регрессии, количество митозов в 1 мм2, показали статистически значимые различия между группами (р=0,001-0,002). Количество случаев изъязвления ПМК имело тенденцию к понижению с увеличением индекса соотношения CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов. Так, в 1-й группе изъязвление первичной опухоли отмечалось в 92,3% случаев, тогда как в 4-й группе - в 55,2% случаях. Наличие участков регрессии первичной опухоли в 1-й и 2-й группах составили более 30%, тогда как в 3-й и 4-й группах - не более 5%. Случаи, когда митозы в ПМК отсутствовали, не зафиксированы в 1-й группе. Во 2-й и 3-й группах было 5,9 и 4,5% случаев отсутствия митозов соответственно, в то же время в 4-й группе их зафиксировано в 5 раз больше (31,6%). Таким образом, отмечалась положительная корреляция количества случаев отсутствия митозов с увеличением индекса соотношения CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов. В остальном распределение случаев меланомы по количеству митозов во всех группах было примерно одинаковым.

Прогрессирование опухолевого процесса отмечено в 120 (66,7%) случаях. При этом только местный рецидив МК выявлен в 16 (13,3%) случаях, только метастазы в регионарных лимфатических узлах - в 26 (21,7%) случаях, только отдаленные метастазы - в 6 (5%) случаях. Синхронный или метахронный местный рецидив и метастазы в регионарных лимфатических узлах установлены в 10 (8,3%) случаях, метастазы в регионарных лимфатических узлах и отдаленные метастазы - в 40 (33,3%) случаях, местный рецидив с метастазами в лимфатических узлах и отдаленными метастазами - в 22 (18,3%) случаях, случаи сочетания местного рецидива с отдаленными метастазами не наблюдались, летальный исход зафиксирован в 74 (41,1%) случаях. Анализ частоты локальных рецидивов, метастазов в регионарных лимфатических узлах и отдаленных метастазов, представленный в табл. 4, показал некоторую закономерность.

Таблица 4. Сравнительный анализ различных исходов меланомы кожи в зависимости от индекса соотношения CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов

Из табл. 4 следует, что между группами имелись статистически достоверные различия в течении заболевания. Частота локальных рецидивов заболевания в 1, 2 и 3-й группах была статистически значимо выше, чем в 4-й группе (р=0,03). Частота метастазов в регионарных лимфатических узлах в 1, 2 и 3-й группах также была статистически значимо выше, чем в 4-й группе (р=0,003). Частота отдаленных метастазов в 4-й группе была статистически значимо ниже, чем в остальных группах (р=0,0008).

Медиана длительности наблюдения за больными составила 111 мес (от 64 до 124) (табл. 5).

Таблица 5. Сравнительный анализ исходов меланомы кожи в зависимости от индекса соотношения CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов

Время без прогрессирования и продолжительность жизни оказались максимальными в 4-й группе: 5-летняя общая и безрецидивная выживаемость составили 76 и 58% соответственно. В других группах отдаленные результаты были значительно хуже. Наихудшие показатели зарегистрированы в 1-й группе: 5-летняя общая и безрецидивная выживаемость составила 39 и 8% соответственно. Различия между группами статистически значимы и по времени без прогрессирования (р=0,03) и по продолжительности жизни (р=0,04).

Обсуждение

В нашем исследовании получены статистически достоверные различия в 4 группах по стадии заболевания, наличию изъязвления, участков регрессии, количеству митозов в первичной опухоли. Частота метастазов в регионарных лимфатических узлах в группах с низким соотношением CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов (1-я и 2-я группа) статистически значимо выше, чем в группах с высоким соотношением CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов (3-я и 4-я группа) (р=0,003). Частота отдаленных метастазов в 4-й группе статистически значимо ниже, чем в остальных группах (р=0,00008).

Большинство данных литературы свидетельствует о том, что высокое соотношение CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов в опухолевой ткани является положительным прогностическим маркером течения онкологического заболевания [8-12].

В нашем исследовании преобладание CD8 Т-лимфоцитов над FoxP3 T-лимфоцитами более чем в 3 раза коррелировало с благоприятным прогнозом течения заболевания и высокой выживаемостью больных с МК, что согласуется с данными Z. Feng и соавт. [12], проводивших исследование 36 случаев ПМК.

Пятилетняя общая и безрецидивная выживаемость были максимальными в 4-й группе (76 и 58% соответственно), т. е. при достаточно выраженной инфильтрации опухоли CD8+-цитотоксическими лимфоцитами. Минимальные значения этих показателей зарегистрированы в 1-й группе (39 и 8% соответственно; р<0,03-0,04).

Таким образом, можно предположить, что соотношение инфильтрирующих первичную МК CD8/FoxP3 Т-лимфоцитов определяет уровень локального иммунного ответа организма, необходимого для сдерживания прогрессирования злокачественного процесса и лучшей выживаемости больных.

Заключение

Комплексный подход к изучению субпопуляций иммунных клеток в микроокружении опухоли, нередко обладающих прямо противоположным действием на опухолевые клетки, помогает получить более полную картину межклеточного взаимодействия и спрогнозировать течение и исход заболевания.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования: Я.А.Б., Л.В.Д., Я.В.В., Н.В.К.

Сбор и обработка материала: Я.А.Б.

Статистическая обработка данных: И.А.П., Я.А.Б.

Написание текста: Я.А.Б.

Редактирование: Я.В.В., Л.В.Д.

Конфликт интересов отсутствует.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail