Исследование чувствительности Streptococcus agalactiae, выделенных из урогенитального тракта, к действующим веществам, входящим в состав препарата «Депантол»

Streptococcus agalactiae (Streptococcus group B по R. Lancefield) — грамположительные кокки, образующие короткие цепочки, факультативные анаэробы, способные проявлять гемолитическую активность. Стрептококк группы В (СГВ), являющийся обитателем прямой кишки, периодически распространяется на другие локусы (влагалище, урогенитальный тракт, кожу и пр.). У большинства взрослых людей колонизация протекает бессимптомно, однако СГВ может быть причиной воспалительных заболеваний урогенитальной области, таких как вульвовагинит, уретрит, цистит и др. Наиболее высокий уровень колонизации отмечен у сексуально активных женщин репродуктивного возраста и беременных [1—3]. Известно, что S. agalactiae выделяется из влагалища у 20—40% женщин. У беременных СГВ выделяют в 7—30% наблюдений [4]. Из них 60—75% остаются СГВ-носителями до конца беременности, что достоверно связано с самопроизвольными выкидышами, преждевременными родами, преждевременным излитием околоплодных вод, ранними септицемиями новорожденных. Кроме того, у колонизированных стрептококком группы В беременных чаще развиваются инфекции мочевыводящих путей, возможен хориоамнионит в родах, а также послеродовой эндометрит [5—7]. Контаминация плода в родах стрептококком группы В происходит у каждой второй роженицы, но только у 2—5% инфицированных новорожденных развиваются тяжелые формы СГВ-инфекций с летальностью 20—70%, особенно при преждевременных родах [8]. Тяжелые инфекции ассоциированы с длительными родами и ранним разрывом плодных оболочек. Чаще всего стрептококковый сепсис регистрируют у новорожденных, родившихся у матерей с высокой степенью колонизации влагалища, тем не менее около 30% неонатального сепсиса регистрируют при небольшом количестве S. agalactiae в родовых путях [9]. Заражение плода происходит при заглатывании и аспирации инфицированных околоплодных вод или интраканаликулярно [10—12].

Согласно клиническим рекомендациям, показаниями для обследования женщин на наличие стрептококка группы В являются воспалительные заболевания урогенитального тракта, бессимптомная бактериурия беременной, преждевременные роды, СГВ-инфекция новорожденного в анамнезе, повышение температуры тела в родах, длительный безводный промежуток [13].

Выделение S. agalactiae из мочи и/или вагинально-ректального содержимого считается основанием для назначения этиотропной терапии при наличии клинических проявлений. Показаниями для антибиотикопрофилактики в родах являются положительный скрининг на СГВ в поздние сроки беременности (35—37 нед) и наличие акушерских факторов риска [14].

Поиск новых лекарственных препаратов, действующих на СГВ, является весьма актуальным. Кроме того, крайне важна возможность использования этих препаратов в ранние сроки беременности.

Цель настоящего исследования — изучение антибактериальных свойств компонентов, входящих в состав вагинальных суппозиториев «Депантол», в отношении клинических изолятов S. agalactiae, выделенных из урогенитального тракта женщин.

Коллекция чистых культур S.agalactiae состояла из 25 клинических штаммов, выделенных из урогенитального тракта женщин, в том числе беременных. Для культивирования использовали 5% кровяной агар и питательный бульон с селективной стрептококковой добавкой («Oxoid», Великобритания). Идентификацию микроорганизмов проводили с использованием масс-спектрометра MicroFlex («Bruker», Германия). Достоверной считали идентификацию с пограничным показателем более 2000.

Депантол — это вагинальные суппозитории, содержащие 100 мг декспантенола и 16 мг хлоргексидина биглюконата в виде 20% раствора. В качестве вспомогательных веществ используется смесь макроголов (макрогол 400, макрогол 1500).

В исследовании использовали основы препаратов (декспантенол, хлоргексидин и макрогол), входящих в состав депантола.

Декспантенол (ДП-гель, ДП 1:10) — прозрачная вязкая гелевая субстанция, хорошо растворимая в дистиллированной воде. Чувствительность микроорганизмов определяли как к цельному препарату, так и в разведении 1:10. Декспантенол относится к фармакологическим группам витаминов и витаминоподобных веществ, регенерантов и репарантов, а также к дерматотропным средствам. Он восполняет дефицит пантотеновой кислоты, обладает противовоспалительным действием, стимулирует процессы регенерации.

Хлоргексидин (ХГ) — прозрачная жидкость. Чувствительность микроорганизмов определяли к 20% раствору вещества, входящему в состав препарата Депантол. Хлоргексидин является антисептическим препаратом, активным в отношении широкого спектра микроорганизмов, включая грамположительные и грамотрицательные бактерии, простейшие и вирусы.

Макрогол 400 (М) — прозрачная жидкость.

Для определения чувствительности микроорганизмов к препарату использовали Blood Muller-Hinton Agar («Oxoid», Великобритания) с добавлением 3% донорской эритроцитарной массы и 2% сыворотки крупного рогатого скота.

Готовили микробную взвесь чистой культуры S. agalactiae, доводили до 0,5 по МакФарланду, наносили на Blood Muller-Hinton Agar и равномерно с помощью шпателя распределяли по поверхности среды. После этого 50 мкл тестируемого раствора вносили в пробитые в агаре отверстия диаметром 5 мм. Гель наносили стерильной калиброванной петлей непосредственно на поверхность агара. Инкубировали 24 ч при 37 °C в атмосфере 5% CO₂.

Учет результатов чувствительности микроорганизмов к препарату проводили визуально, замеряя диаметр зоны задержки роста в миллиметрах.

Все 25 штаммов S. agalactiae (100%) оказались чувствительными к хлоргексидину (ХГ). Зоны задержки роста вокруг отверстий с внесенным препаратом составили от 16 до 26 мм (рис. 1, 2,

Интересные результаты получены и при определении чувствительности клинических изолятов S. agalactiae к декспантенолу. Чувствительными к декспантенолу в разведении 1:10 (ДП 1:10) оказались 17 (68%) штаммов стрептококков. Зоны задержки роста составили от 18 до 28 мм (см. рис. 1). Резистентными были квалифицированы штаммы, не имеющие зоны задержки роста вокруг отверстия с внесенным препаратом.

На поверхности агара, обработанной неразведенным декспантенолом (ДП-гель), в 80% случаев наблюдался следующий эффект: имело место видимое увеличение размеров колоний S. agalactiae при одновременном снижении их количества. Наблюдался рост не в форме газона, а в виде отдельных, более крупных колоний (см. рис. 2). Один штамм (4%) имел зону задержки роста вокруг нанесенного неразведенного геля (см. рис. 3).

Все штаммы стрептококков оказались резистентны к макроголу 400, используемому в качестве вспомогательного вещества суппозитория.

СГВ проявляет стабильную чувствительность к пенициллину и другим β-лактамным антибиотикам. В последние годы значительно возросла резистентность S. agalactiae к линкозамидам, макролидам, тетрациклинам, хлорамфениколу. В некоторых странах частота выделения устойчивых к клиндамицину штаммов достигла 13—20%, а к эритромицину — 25—32%. В ряде случаев встречается сочетание устойчивости к нескольким группам антибиотиков одновременно. В последнее время в Японии и США выделили штаммы S. agalactiae с высоким уровнем устойчивости к широкому спектру фторхинолонов [16, 17]. Проблема селекции микроорганизмов, устойчивых к антимикробным препаратам, в том числе стрептококков группы В, является поводом к поиску новых средств для этиотропной терапии и профилактики передачи СГВ от матери плоду.

Хлоргексидин длительное время широко используется в акушерстве и гинекологии в качестве антисептического средства, активного в отношении вегетативных форм грамположительных и грамотрицательных бактерий, простейших, липофильных вирусов, дрожжеподобных грибов и дерматофитов. За более чем 60-летнюю историю применения хлоргексидина не было сообщений о появлении резистентных к нему штаммов микроорганизмов.

F. Facchinetti и соавт. [18] в рандомизированном контролируемом исследовании показали высокую эффективность интравагинального применения 140 мл 0,2% раствора хлоргексидина каждые 6 ч в сравнении с внутривенным введением ампициллина в дозе 2 г каждые 6 ч для предупреждения вертикальной передачи стрептококка группы В. Полученные результаты свидетельствуют о том, что в группе хлоргексидина (109 беременных) число колонизации новорожденных стрептококком группы В составило 15,6%, что было сопоставимо с показателями группы ампициллина (108 беременных) — 12%, причем в группе хлоргексидина показатели колонизации новорожденных E. coli были статистически достоверно лучшими (лишь 1,8%; p<0,05) по сравнению с группой ампициллина (7,4%).

В 2006—2008 гг. нами была проведена оценка эффективности суппозиториев и вагинальных таблеток Гексикон, содержащих в своем составе хлоргексидина биглюконат, в лечении бактериального вагиноза. Была установлена клиническая и микробиологическая эффективность применения разных схем терапии препаратом Гексикон по окончании лечения, которая составила 66,7% для схемы в 1 суппозиторий в течение 7 дней и 96,7% для схемы в 2 суппозитория в течение 7 дней. Что касается вагинальных таблеток Гексикон, нами проведена III фаза сравнительного открытого рандомизированного исследования эффективности и безопасности препарата Гексикон (таблетки вагинальные) в сравнении с препаратом Трихопол (таблетки вагинальные) у пациенток с бактериальным вагинозом. Было показано, что вагинальные таблетки Гексикон, применяемые по 1 и 2 таблетки в течение 7 дней, сопоставимы по эффективности с вагинальными таблетками Трихопол, используемыми для лечения бактериального вагиноза. Эффективность терапии бактериального вагиноза препаратом Гексикон составила 93,3 и 100% соответственно при использовании их 1 и 2 раза в сутки.

Настоящее исследование подтвердило высокую эффективность ХГ и в отношении S. agalactiae.

Декспантенол входит в состав широкой линейки коммерческих препаратов и известен как стимулятор регенерации тканей с противовоспалительным и дерматопротективным действием. Прямой антимикробный эффект декспантенола мало изучен. В нашем опыте более 2/3 штаммов стрептококков группы В оказались чувствительными к декспантенолу в разведении 1:10, что доказывает перспективность применения декспантенола, особенно в сочетании с антисептическим средством, для комплексной терапии и химиопрофилактики инфекций, вызываемых стрептококками группы В.

Действующие вещества, входящие в состав вагинальных суппозиториев «Депантол», а именно, хлоргексидин и декспантенол, в опыте in vitro показали высокую активность в отношении клинических штаммов S. agalactiae, выделенных из урогенитального тракта беременных и небеременных женщин.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.