Иммунологические показатели и энзиматическая активность лимфоцитов периферической крови у детей с гипертрофией глоточной миндалины

Эпидемиологические исследования, проведенные в Российской Федерации, показали неуклонный рост числа детей с заболеваниями органов лимфоглоточного кольца, в частности с воспалением и увеличением в размерах глоточной миндалины (ГГМ) — от 20 до 50% детской популяции [1—3]. Одной из основных причин в развитии воспаления глоточной миндалины у детей является воздействие бактериальной и вирусной флоры на слизистую оболочку в условиях измененной иммунологической реактивности организма.

В настоящее время доказано, что в основе функциональной активности лимфоцитов — основного структурно-функционального элемента иммунной системы — лежат их метаболические реакции. Так, с первых минут реакции бласттрансформации лимфоцитов увеличивается потребление АТФ [3—5]. Через 1—2 ч активируется митохондриальное дыхание лимфоцитов, что позволяет клеткам перейти на более высокий энергетический уровень, и синтез АТФ начинает преобладать над его потреблением [6, 7].

Установлена зависимость экспрессии на лимфоцитах крови СD₄⁺— и СD₈⁺-антигенов от внутриклеточной концентрации аденозина и аденозиндифосфорной кислоты [5, 8].

Выявлено, что глутатион может непосредственно модулировать пролиферацию Т-лимфоцитов [9, 10].

Особенно высокой информативностью для исследования метаболизма лимфоцитов обладают окислительно-восстановительные ферменты. Это связано с тем, что, являясь переносчиками электронов в клетке, они осуществляют ключевые реакции метаболизма и координируют сопряженные метаболические пути.

Цель исследования — изучение иммунологических параметров и показателей активности НАД (Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах периферической крови у детей раннего возраста с гипертрофией глоточной миндалины.

Обследованы 57 детей в возрасте от 1 года до 3 лет (средний возраст 2,26±0,76 года) с ГГМ, из них 32 (56,14%) мальчика и 25 (43,86%) девочек.

Критериями включения в исследование являлись: возраст 1—3 года; ГГМ II, III степени; европеоидная раса; отсутствие терапии в течение месяца, предшествующего обследованию.

Критерии исключения из исследования: нормальная аэрация полости носа; ГГМ I степени; наличие сопутствующих заболеваний (наследственных, аллергических, аутоиммунных и пр.).

Диагноз ГГМ был установлен на основании жалоб и клинической картины: затруднение носового дыхания, дыхание через рот, отделяемое из носа, храп в ночное время; эндоскопической картины: наличие аденоидных вегетаций II, III степени в полости носоглотки.

Контрольную группу составили 35 практически здоровых детей в возрасте 1—3 года (средний возраст 2,14±0,84 года), из них 19 (54,29%) мальчиков и 16 (45,71%) девочек. Мононуклеары выделяли из цельной гепаринизированной крови центрифугированием в градиенте плотности фиколл—верографин [11]. Методом проточной цитофлуориметрии, используя FACS-Callibur («Becton Dickinson», США) и реагенты Simul Test IMK-lymphocyte Kit (США), определяли количество СD₃⁺-, СD₄⁺-, СD₈⁺-, СD₁₆⁺_/56⁺-, СD₁₉⁺-клеток в периферической крови.

Концентрацию иммуноглобулинов классов А, M, G в сыворотке крови оценивали методом радиальной иммунодиффузии в геле [12]. Содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови исследовали в реакции с полиэтиленгликолем [13].

В лимфоцитах периферической крови осуществляли биолюминесцентное определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3ФДГ), НАД- и НАДН-зависимой лактатдегидрогеназы (НАДЛДГ и НАДНЛДГ соответственно), НАД- и НАДН-зависимой малатдегидрогеназы (НАДМДГ и НАДНМДГ соответственно), НАД- и НАДН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДГДГ и НАДНГДГ соответственно), НАДФ- и НАДФН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДФГДГ и НАДФНГДГ соответственно), НАД- и НАДФ-зависимой изоцитратдегидрогеназы (НАДИЦДГ и НАДФИЦДГ соответственно), малатдегидрогеназы декарбоксилирующей (НАДФМДГ) и глутатионредуктазы (ГР) [14].

Активность исследуемых оксидоредуктаз выражали в ферментативных единицах (1Е=1 мкмоль/мин) на 10⁴ клеток. Исследование проводили на ферментативном препарате NAD (P): FMN оксидоредуктаза-люцифераза из Photobacteriumleiognathi (получен в Институте биофизики РАН, Красноярск). Измерение уровня биолюминесценции осуществляли на биолюминометре «БЛМ 8801» (Россия).

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием программы Statistica v. 6.0 («Stat Soft Ins.», США). Нормальность распределения показателей определялась с помощью метода Колмогорова—Смирнова. Количественные показатели, учитывая нормальное распределение, описывались с использованием средних арифметических значений (М) и стандартной ошибки среднего (±m). Для изучения статистической значимости различий между количественными признаками представленных групп применяли t-критерий Стьюдента. Критический уровень значимости (p) при проверке статистических гипотез принимали равным 0,05.

Анализ полученных данных показал статистически значимое повышение процентного содержания лимфоцитов в периферической крови у детей с гипертрофией глоточной миндалины по сравнению с аналогичными показателями в контрольной группе (табл. 1).

Изучение иммунофенотипа лимфоцитов периферической крови обнаружило выраженную тенденцию к понижению процентного содержания СD₄⁺-клеток и статистически значимое увеличение абсолютного числа СD₈⁺-клеток и снижение процентного содержания СD₁₆⁺_/56⁺-клеток периферической крови в группе детей с ГГМ по сравнению с параметрами контрольной группы (см. табл. 1).

Реакция гуморального звена иммунитета характеризовалась снижением концентрации IgA в сыворотке крови в группе детей с ГГМ относительно показателей контрольной группы (р<0,01). Следует отметить статистически значимое повышение уровня ЦИК в сыворотке крови у детей с ГГМ по сравнению с контролем (см. табл. 1).

Результаты проведенных исследований позволили установить, что в группе детей с ГГМ имеют место изменения показателей активности НАД (Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах периферической крови (табл. 2). Так, в лимфоцитах крови в группе детей с ГГМ наблюдается повышение активности Г6ФДГ, что определяет интенсификацию в клетке пластических процессов, зависящих от продуктов пентозофосфатного цикла [15, 16]. Однако увеличение оттока интермедиатов на реакции пластического обмена вызывает снижение интенсивности субстратного потока по гликолизу, что выражается в пониженном уровне анаэробной реакции ЛДГ. В качестве компенсаторной реакции, направленной на активацию интенсивности анаэробного окисления глюкозы в группе детей с ГГМ, можно рассматривать повышение активности Г3ФДГ-фермента, осуществляющего перенос продуктов липидного катаболизма на окислительно-восстановительные реакции гликолиза [17].

Сниженный уровень гликолиза в лимфоцитах периферической крови у детей с ГГМ определяется понижением активности анаэробной реакции ЛДГ и выраженной тенденцией к снижению НАДН-зависимой реакции МДГ (см. табл. 2). Снижение на этом фоне активности аэробной реакции ЛДГ, вероятно, свидетельствует о более экономном использовании клеткой наработанного пирувата.

Состояние митохондриального компартмента в лимфоцитах периферической крови у детей с ГГМ характеризуется повышением активности НАДИЦДГ, НАДМДГ, а также увеличением активности вспомогательной (НАДФИЦДГ) и шунтирующей (НАДФМДГ) реакцией и сниженным уровнем оттока интермедиатов цикла Кребса на реакции аминокислотного обмена через НАДН- и НАДФН-зависимые глутаматдегидрогеназы (см. табл. 2). Следовательно, у детей с ГГМ в лимфоцитах крови отмечается повышенная интенсивность субстратного потока по циклу трикарбоновых кислот, вносящему наибольший вклад в процессы внутриклеточного энергообразования.

В то же время интенсивность субстратного взаимодействия цикла Кребса с реакциями аминокислотного обмена снижена. Так, установлено снижение активности НАД- и НАДФ-зависимых глутаматдегидрогеназ, осуществляющих перенос субстратов на реакции лимонного цикла (см. табл. 2).

Следует отметить пониженный уровень ГР в лимфоцитах крови у детей с ГГМ, что отражает снижение активности глутатионзависимой антиоксидантной системы клетки [18].

Результаты проведенного исследования показали, что в группе детей с ГГМ на фоне повышенного процентного содержания лимфоцитов в периферической крови отмечаются изменения их иммунофенотипического спектра, а также снижение концентрации IgA и повышение уровня ЦИК в сыворотке крови.

Кроме того, обнаружено изменение метаболической активности лимфоцитов периферической крови, которые характеризуются повышением активности рибозо-5-фосфат и НАДФН-зависимых пластических процессов, снижением гликолиза и повышением интенсивности аэробных дыхательных процессов как на начальных, так и на терминальных стадиях цикла трикарбоновых кислот, понижением глутатионзависимой антиоксидантной защиты клетки.

Конфликт интересов: авторы статьи подтвердили отсутствие финансовой поддержки/конфликта интересов, о которых необходимо сообщить.