Ранняя диагностика развития пародонтита с помощью определения прогностически значимых РНК-маркеров

Цель исследования — выявление прогностически значимых РНК-маркеров, гиперпродукция которых ассоциирована с нарастанием симптомов воспаления в тканях пародонта.

Материал и методы. В исследовании принимали участие 288 пациентов в возрасте от 21 года до 63 лет без тяжелой общесоматической патологии. Пациенты были разделены на 2 группы: 204 пациента с хроническим генерализованным пародонтитом (ХГП) и 84 пациента без патологии пародонта. При установлении диагноза ХГП учитывали такие жалобы пациентов, как кровоточивость десен, запах изо рта, подвижность, потеря зубов. Также рассматривались данные клинико-рентгенологической картины: глубина пародонтальных карманов, индексы Silness—Loe и Muhlemanna, оголение корней зубов, состояние костной ткани. Принимались во внимание возраст и пол обследуемых пациентов. В свою очередь группа пациентов с ХГП была разделена на подгруппы по следующим признакам: гноетечение из пародонтальных карманов, кровоточивость десен, табакокурение.

Для проведения анализа использовали смывы из наиболее глубоких пародонтальных карманов с помощью стерильных бумажных эндодонтических штифтов. Для выделения РНК штифты консервировали в пробирках типа Эппендорф объемом 1,5 мл, содержащих по 0,5 мл РНК-латера.

Перед выделением материал смыва осаждали центрифугированием на настольной центрифуге в течение 5 мин. Из пробирки тщательно удаляли супернатант и вносили 200 мкл лизирующего раствора. Далее в пробирку с образцом вносили 100 мкл водонасыщенного фенола и 100 мкл смеси хлороформа и изоамилового спирта (24:1). Содержимое тщательно перемешивали и инкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре. Пробирки центрифугировали в течение 10 мин, затем отбирали верхнюю (водную) фазу и переносили в чистую пробирку. К ней добавляли 200 мкл смеси хлороформа и изоамилового спирта (24:1) и центрифугировали в течение 5 мин. Отбирали верхнюю фазу и переносили в чистую полипропиленовую пробирку объемом 1,5 мл. К водной фазе добавляли чистый изопропиловый спирт объемом 200 мкл. Супернатант тщательно удаляли с помощью водоструйного насоса, касаясь осадка, содержащего нуклеиновые кислоты. Осадок промывали, внося в пробирку 100 мкл 70% водного этилового спирта, и, переворачивая пробирку 5—6 раз, добавляли к нему 16,5 мкл дистиллированной воды, затем инкубировали при температуре 50 °C в течение 5 мин. Препараты РНК хранили при температуре –20 °С не более 2 мес.

Результаты. Установлена достоверная разница содержания мРНК IL-8 в смывах у пациентов в подгруппах с гноетечением и группы контроля. При анализе выборок пациентов с потерей зубов в связи с заболеванием пародонта было выявлено повышение содержания мРНК IL-8 в смывах из пародонтальных карманов. Повышенное содержание мРНК IL-8 подтверждает тяжелое течение хронического пародонтита и частое абсцедирование. При анализе групп курящих и некурящих пациентов достоверных различий по величинам молекулярных маркеров выявлено не было. Анализ групп пациентов с наследственной отягощенностью одновременно по материнской и отцовской линиям позволил выявить корреляцию генетического фактора с повышенным содержанием мРНК IL-8 в смывах пародонта.

Противоречивые данные были получены при статистической обработке выборок по полу. Так, среди женщин определена выраженная связь по признакам мРНК TNF, MMP8, MMP9 по сравнению с общей выборкой пациентов, куда входили и мужчины и женщины. Наиболее ярким отличием в выборке, включающей в себя только мужчин, является наличие устойчивой корреляции между маркерами мРНК TNFα, MMP8 и MMP9, приближающейся к величине этого параметра в выборке группы здоровых пациентов, смешанных по полу.

У некурящих пациентов была установлена ассоциация между параметрами комплекса признаков «содержание мРНК TNF-MMP8-MMP9», которое в выборке курящих пациентов находится на пределе достоверности (p в диапазоне 0,32—0,54). Это наблюдение показывает, что курение вызывает нарушение нормального функционирования сигнальных механизмов, обеспечивающих защиту пародонта от инфекции.

Выводы. Обострение хронического генерализованного пародонтита сопровождается повышением мРНК хемокина IL-8 в тканях пародонта. На содержание мРНК IL-8 также влияет возраст пациента. Содержание мРНК IL-8 может рассматриваться в качестве молекулярного маркера нарастания обострения симптомов воспаления. Имеется положительная корреляция между содержанием мРНК TNFα, MMP8 и MMP9 в здоровых тканях пародонта и в тканях пародонта при хроническом генерализованном пародонтите. У мужчин координация механизма TNFα-зависимой индукции синтеза MMP лучше, чем у женщин.