Влияние гемцитабина на множественную лекарственную устойчивость клеток рака поджелудочной железы

Лекарственная терапия рака поджелудочной железы (РПЖ) стандартным химиопрепаратом гемцитабин (2′, 2′-дифлуородеоксицитидин) сопряжена с высокой частотой развития резистентности.

Цель исследования — изучение воздействия гемцитабина на механизмы множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) клеток РПЖ.

Материал и методы. Использовали две линии клеток РПЖ — MiaPaca2 и PANC1. Цитотоксические свойства гемцитабина оценивали при помощи метода МТТ-теста. Уровни мРНК генов МЛУ оценивали с помощью полуколичественной методики ОТ-ПЦР. Экспрессию P-gp определяли количественным иммунофлюоресцентным методом с использованием проточной цитофлуориметрии и моноклональных антител (АТ).

Результат. Обе клеточные линии проявили резистентность даже на сверхвысоких дозах к гемцитабину (0,001 М). Значения концентраций, при которых происходило снижение выживаемости культур клеток на 20 и 50% (IC20 и IC50), были 85±12,3 нМ и 2,3±1,42 µМ для линии PANC1; 111±23 нМ и 0,43±0,19 µМ для линии MiaPaca2. Однако при воздействии гемцитабина в течение длительного времени, при условии добавления препарата к клеткам при пересеве, наблюдалась гибель линий даже при небольших концентрациях гемцитабина (IC20). Данное явление может объясняться кумулятивным накоплением гемцитабина во внутриклеточном компартменте, потерей адгезивных свойств клетки и невозможностью клетки прикрепиться к подложке. В клетках обеих линий экспрессируются гены MRP1, MRP5, BCRP. Экспрессия генов MDR1, MRP2, MRP3, LRP отсутствовала. Уровни экспрессии генов MRP1—5 при воздействии гемцитабина в концентрациях IC20 и IC50 на культуры клеток в наших опытах не менялись. Мы обнаружили активацию экспрессии гена MDR-1 под воздействием гемцитабина в клетках линии PANC1, однако в клетках линии MiaPaca2 активация отсутствовала. Количество белка Pgp без добавления гемцитабина в клетках линии PANC1 и MiaPaca2 было низким — всего 0,86 и 0,34% клеток соответственно связывали АТ к белку. Однако после инкубации клеток с гемцитабином IC50 это количество повысилось до 4,16 и 7,3% клеток соответственно. По-видимому, это связано с общим ответом на стресс клеток.

Вывод. Гемцитабин — цитотоксичный препарат для линий клеток РПЖ, однако даже при сверхвысоких дозах клетки РПЖ могут проявлять к нему резистентность. Гемцитабин не влияет на уровни экспрессии генов MRP1—5 в концентрациях до IC50 в клетках исследованных линий. Гемцитабин способствует активации экспрессии гена MDR1 в клетках линии PANC1. В клетках линии MiaPaca2 гемцитабин не влияет на уровень экспрессии гена MDR1, однако вызывает увеличение количества его белка P-gp.