Метод диэлектрической спектроскопии в оценке параметров агрегации тромбоцитов пробах цельной крови

Классическая импедансометрическая агрегометрия в пробах цельной крови широко используется в диагностике патологии тромбоцитов, а также предлагается в качестве метода оценки эффективности дезагрегационной терапии. Изменение импеданса в процессе исследования связано с процессом адгезии образуемых тромбоцитарных сгустков на поверхности электродов после добавления к пробе индуктора агрегации. При определенных условиях, после достижения максимальных значений может наблюдаться снижение импеданса, обусловленное процессом дезагрегации тромбоцитов, что отражает обратимость феномена тромбоцитарной адгезии и агрегации. Вместе с тем, традиционный вариант импедансометрического тестирования, реализованный, в том числе в агрегометрах Хронолог, оценивает только одну компоненту импеданса — падение электрической проводимости исследуемого образца. С целью оценки второй емкостной (мнимой) компоненты импеданса и ее диагностического значения мы использовали метод диэлектрической спектрометрии. Посылаемый при этом через исследуемый образец крови импульс переменного тока сравнивается с эталонным импульсом той же частоты и амплитуды. За счет поляризации в образце появляется локальное электрическое поле, которое приводит к падению амплитуды и фазовому сдвигу пропускаемого сигнала. На основе этих двух показателей рассчитывается полный импеданс образца, включающий как проводимость, так и емкостные характеристики мембран клеток. Образцы цельной крови 17 пациентов с миелопролиферативными заболеваниями (МПЗ) и 20 здоровых добровольцев анализировали в параллельных тестах на агрегометре Хронолог 700 и диэлектрическом спектрометре. В качестве индуктора агрегации использовали АДФ. При сравнительном анализе агрегатограмм, полученных с помощью диэлектрической спектроскопии и агрегометрии было выявлено качественное совпадение результатов — графики имеют лаг-фазу, фазу максимального развития агрегационного ответа, плато, в некоторых образцах отмечалась дезагрегация. Однако не было обнаружено корреляционной связи между значениями амплитуд агрегации, измеренных разными методами (r=0,44, p<0,05). Величина агрегации была статистически достоверно выше в группе пациентов с МПЗ по сравнению с группой контроля как при измерении на спектрометре (Me=1,4 (1,1—1,6), Ме=1,0 (0,9—1,1) соответственно; р=0,003) так и при измерении на агрегометре (Me=14 (10—16), Ме=10 (8—11) соответственно; р=0,006). При анализе динамики «мнимой» компоненты импеданса показано, что при дезагрегации форменные элементы крови переходят в качественно иное состояние, с более низкими значениям емкостных характеристик, очевидно связанных с изменением трансмембранного потенциала. Таким образом, диэлектрическая спектроскопия обладает дополнительной информативностью и может быть перспективна для внедрения.