Диагностика остеопороза хроматографическими методами

Одной из важных областей клинической лабораторной диагностики различных патологических состояний является диагностика остеопороза, одного из серьезнейших заболеваний. Можно выделить две основных группы маркеров остеопороза. Первая группа: маркеры стабильности коллагенового матрикса (пиридинолин и дезоксипиридинолин-ПИД и ДПИД). Вторая группа маркеров диагностики остеопороза — витамины Д3 (холекальциферол) и Д2 (эргокальциферол). Для диагностики недостаточности минерализации костной ткани используется детектирование содержания витамина 25-ОН-витамина Д3 в крови. 25-ОН-витамин-Д2 определяется при недостаточности витамина Д для мониторинга лекарственной терапии препаратами витамина Д2. Материал и методы. Разработана простая и удобная методика по количественному определению общего содержания ПИД и ДПИД в моче. В методике применяется изократическая жидкостная хроматографическая система с флуоресцентным детектированием при длинах волн: возбуждения — 290 нм и эмиссии 395 нм. В процедуре подготовки мочи к анализу используется кислотный гидролиз, при этом использование устойчивого внутреннего стандарта, позволяет компенсировать потери и вариацию в процессе этапа подготовки пробы, что улучшает точность и воспроизводимость данной методики. С помощью второй разработанной методики возможно одновременное и точное количественное определение 25-ОН-витамина-Д3 и 25-ОН-витамина — Д2 с хроматографированием на обратно-фазной колонке с последующим детектированием с УФ-спектре при длине волны 265 нм. В процессе пробоподготовки проб для анализа при осаждении белков плазмы крови и последующей твердо-фазной экстракции удаляются все мешающие соединения. Результаты. Степень извлечения ПИД и ДПИД из мочи составляет 95%, а степень извлечения витаминов из плазмы крови — 87%. Нижний предел количественного определения для пиридинолина и дезоксипиридинолина составляет 15 пмоль/мл, а для холекальциферола и эргокальциферола — 1,5 мкг/л. Калибровочная зависимость ПИД и ДПИД линейна в определяемом диапазоне значений 5—2000 пмоль/мл, а витаминов Д3 и Д2 — 5—250 мкг/л. Хроматографическое разделение проб мочи и крови в обоих случаях занимает не более 15 мин. Вывод. Разработанные хроматографические методики позволяют безопасно и надежно определить две группы маркеров для диагностики остеопороза, используя высокоэффективную жидкостную хроматографию.