Разработка набора реагентов для иммунного блоттинга при диагностики цитомеголовирусной инфекции

В связи с широким распространением цитомегаловирусной инфекции (ЦМВИ) все более важным встает вопрос дифференциальной диагностики данного заболевания. При этом крайне важно определить не только наличие вируса в организме, но и установить стадию заболевания. Важным моментом является выявление специфических антител классов М и G к отдельным антигенам ЦМВ, позволяющее отслеживать динамику смены белков в ходе инфекционного процесса, что имеет важное диагностическое и прогностическое значение. Цель — разработка и оценка эффективности применения иммуноферментной тест-системы для выявления и подтверждения наличия антител классов М и G к индивидуальным белкам цитомегаловируса человека методом иммунного блоттинга. Задачи: в ходе разработки тест-системы были решены задачи по подбору условий культивирования цитомегаловируса штамма AD-169 и получению ультразвукового лизатного антигена; отработке получения иммуносорбента; подбору состава реагентов для проведения анализа; отработке постановки иммуноферментного анализа; оценке чувствительности и специфичности разработанной тест-системы на сыворотках стандартных панелей; апробация тест-системы на клиническом материале. Материал и методы. При разработке тест-системы использовали электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия, электроперенос разделенных белков из геля на нитроцеллюлозную мембрану (блоттинг), выявление белков с помощью иммуноферментного анализа. Результаты. Разработана тест-система для выявления антител классов М и G к отдельным антигенам цитомегаловируса методом иммунного блоттинга в формате Western Blot — «ИФА-Блот-ЦМВ-IgМ/IgG». По результатам испытаний, проведенных с использованием сывороток стандартных панелей, новая тест-система имеет диагностическую эффективность, не уступающую эффективности своего аналога — тест-системы «Anti-CMV-Western Blot (IgM/IgG)» («Euroimmun AG», Германия). Разработаны рекомендации по интерпретации полученных результатов и применению иммуноблота в диагностике цитомегаловирусной инфекции. Вывод. Разработанная тест-система «ИФА-Блот-ЦМВ-IgM/IgG» рекомендуется к применению в качестве подтверждающего и дифференцирующего теста при обследовании на цитомегаловирусную инфекцию.