Роль контрольных материалов при выполнении иммуногистохимических исследований

Иммуногистохимические исследования обеспечивают получение информации, имеющей важное прогностическое и предикативное значение и имеют критическое значение для надлежащего и эффективного лечения пациентов. Поэтому особенно актуально стоит вопрос контроля качества проведения таких исследований. Само по себе иммуногистохимическое окрашивание — сложный многоступенчатый процесс, состоящий из последовательных этапов, которые объединяются в несколько фаз: преаналитическую, аналитическую и постаналитическую. Проведение тех или иных контрольных процедур необходимо на каждой из фаз. Согласно Канадской ассоциации патологов, контроли — это приборы, растворы, лиофилизированные препараты, линии клеток или ткани человека, предназначенные для использования в процессе контроля качества. Контроли делятся на положительные и отрицательные. Положительные контроли — это образцы тканей, заведомо содержащих исследуемый антиген. Отрицательные контроли — это ткани, в отношении которых подтверждено отсутствие исследуемого антигена, а также существуют контроли реагентов. В свою очередь, положительные контроли бывают внешние и внутренние. К внешнему контролю относятся ранее описанные положительные образцы тканей или линий клеток, которые исследуют параллельно с образцами. В клиническом иммуногистохимическом исследовании целесообразно в виду важности результата помещать внешний положительный контроль на стекло рядом с материалом пациента. Это сможет вывить сбой в работе автоматических систем окраски, когда препарат оказался пропущен. Внутренние положительные контроли — это ткани в анализируемом препарате, которые содержат антиген-мишень внутри элементов нормальной ткани, в дополнение к элементам ткани, которую предстоит исследовать. Положительные контроли пригодны только в том случае, если они зафиксированы и подготовлены тем же способом, что и анализируемые образцы ткани. Использование положительных контролей, которые обработаны отличным от исследуемых образцов образом не только нецелесообразно, но и может привести к неправильному толкованию результата окрашивания. Общей рекомендацией является использование для контроля нормальных, а не опухолевых тканей, поскольку нормальные ткани имеют более предсказуемую экспрессию антигенов. Готовые положительные контроли позволяют улучшить качество внутрилабораторного контроля, а также незаменимы при тестировании новых антител. Калиброванные контрольные образцы могут состоять из образцов опухоли, нормальных тканей или линий клеток с предварительно определенными и воспроизводимыми уровнями экспрессии исследуемого антигена. Отрицательные контроли подразделяются на специфичные и неспецифичные. Специфичные отрицательные контроли — это ткани, в отношении которых подтверждено отсутствие исследуемого антигена. Этот тип отрицательный контролей позволяет выявить перекрестную реактивность антител с тканью, также используются для подтверждения неспецифического связывания антител и для выявления таким образом ложноположительных результатов. Неспецифичные контроли — это контроли реагентов, замена первичного антитела на разбавитель антитела, неиммунный иммуноглобулин того же разведения и концентрации, неактуальное антитело или буфер (позволяют определить уровень фонового окрашивания ткани и выявить неспецифическое связывание вторичных антител).