Пути защиты от фальсификатов лекарств. Сообщение 1. Оценка качества субстанции и таблеток метопролола сукцината разных производителей по показателям "подлинность" и "содержание действующего вещества"

В последние годы в судебно-химической практике возросло число отравлений лекарственными средствами, в том числе фальсификатами лекарств. Это затрудняет производство судебно-химических исследований, так как наряду с действующим веществом в организме человека могут быть обнаружены его метаболиты и компоненты недоброкачественных лекарственных средств.

Метопролол ((±)-1-[4-(2-метоксиэтил)фенокси]-3-[(1-метилэтил)амино]-2-пропанол, брутто-формула C₁₅H₂₅NO₃) — селективный антагонист β₁-адренорецепторов. В крупных рандомизированных плацебо-контролируемых клинических исследованиях была доказана высокая эффективность метопролола в предотвращении сердечно-сосудистых осложнений и снижении смертности больных артериальной гипертонией и ишемической болезнью сердца [1]. Эффективность при хронической сердечной недостаточности и его антиатерогенная активность доказаны только для лекарственной формы метопролола сукцината с контролируемым высвобождением вещества (беталок ЗОК «АстраЗенека», Швеция). Однако кроме оригинального препарата на мировом фармацевтическом рынке присутствуют дженерики метопролола сукцината. В связи с рекомендациями отечественных и зарубежных руководств лечения и высокой частотой назначения оценка качества дженериковых и оригинальных препаратов метопролола сукцината приобретает особую актуальность [1, 2]. Такие показатели качества, как «подлинность» и «содержание действующего вещества», — основные при выявлении фальсифицированной, недоброкачественной продукции и определении источника поступления препарата на фармацевтический рынок [3, 4].

В современном фармацевтическом анализе все большую популярность приобретают инструментальные экспресс-методы контроля качества лекарственных средств. Среди них особое место занимает метод ближней ИК-спектроскопии (БИК-спектроскопия). Общие фармакопейные статьи, посвященные этому методу, включены практически во все фармакопеи экономически развитых стран [5, 6].

Обладая такими преимуществами, как экспрессность и высокая воспроизводимость результатов анализа, БИК-метод позволяет использовать достижения статистической обработки результатов, в частности многофакторный анализ. Такое сочетание определяет его уникальность, в том числе для подтверждения подлинности и определения содержания действующего вещества в лекарственной форме [7, 8].

Цель работы — изучение возможности применения метода БИК-спектроскопии для контроля качества субстанции и таблеток метопролола сукцината разных производителей.

Были исследованы две серии субстанции метопролола сукцината («Польфарма», Польша), девять серий таблеток беталок ЗОК 100 мг («АстраЗенека», Швеция) и 10 серий таблеток метозок 25, 50, 100, 200 мг («Акрихин», Россия). Субстанция метопролола сукцината вместе с сертификатом анализа получена от производителя. Таблетки беталок ЗОК, согласно сертификату качества, соответствовали стандартам USP. Качество таблеток метозок подтверждено производителем в соответствии с фармакопейной статьей предприятия.

Исследования проводили на БИК-спектрометре ANTARIS II (Thermo Scientific, США). Спектры диффузного отражения получены с использованием интегрирующей сферы; разрешение 4 см^–1, количество сканирований 16, область измерения от 4000 до 10 000 см^–1.

Субстанцию после измельчения в агатовой ступке наносили однородным слоем толщиной 4—6 мм на плоское основание кюветы (h=16 мм, d=11 мм) с плотно прилегающей крышкой. Кювету помещали на интегрирующую сферу и снимали спектры не менее трех раз, перемешивая образец перед каждым измерением. Таблетку препарата помещали на окно интегрирующей сферы, фиксировали ее и снимали спектры диффузного отражения с обеих сторон образца. С целью получения более достоверного результата для каждой серии получали по девять БИК-спектров. Оптимальные условия записи спектров подбирали с учетом соотношения сигнал—шум и минимального времени записи одного спектра. На одно измерение требовалось в среднем около 20 с. Периодически проводилось автоматическое измерение фонового спектра воздуха.

Обработку результатов осуществляли хемометрическими методами с помощью программы TQ Analyst. Оценку спектральных различий между препаратами разных производителей, сериями метопролола сукцината одного производителя, а также между таблетками с разным содержанием действующего вещества проводили методом дискриминантного анализа по 10 главным компонентам. В процессе калибровки для каждой сравниваемой группы/класса программное обеспечение TQ Analyst позволяло вычислить усредненный спектр, который вычитался из отдельных спектров. По величине отклонений на каждой частоте диапазона создавался спектр дисперсии. Графически величины значения дисперсии в виде спектральных расстояний в единицах Маhalonobis'а использовали для ранжирования исследуемых классов. При этом, чем ближе значение расстояния к нулю, тем выше спектральное соответствие [9, 10].

Результат хемометрической обработки БИК-спектров методом дискриминантного анализа представляется в виде двухмерного графика парных расстояний между отдельными сериями препаратов в координатах Mahalonobis'а. Каждая точка на полученной плоскости соответствует отдельному спектру определенной серии препарата.

На первичных БИК-спектрах таблеток метозок в различных дозировках присутствуют полосы разной интенсивности в области смешанных колебаний (от 4000 до 5000 см^–1), первых (от 4800 до 6250 см^–1) и вторых (от 6250 до 9000 см^–1) обертонов. Представляла интерес область 7150—7180 см^–1, в которой наблюдали две полосы поглощения, одна из которых отличалась выраженной интенсивностью (рис. 1).

Для оценки содержания действующего вещества метопролола сукцината в готовых лекарственных формах был применен метод дискриминантного анализа. При статистической обработке спектров четыре группы препаратов разной дозировки — 25, 50, 100 и 200 мг — достоверно заняли различные области в интервале 29 ед. Маhalonobis’а по осям Х и Y (рис. 2).

С помощью метода Stepwise Multiple Linear Regression (SMLR) в программном обеспечении TQ Analyst была создана калибровочная модель по спектрам образцов всех дозировок таблеток метозок, в которой концентрация является функцией поглощения при разных частотах (рис. 3).

Таким образом, обнаруженные на БИК-спектрах таблеток метопролола сукцината (препарат метозок) полосы поглощения, обусловленные наличием вспомогательного вещества талька, позволили отличить препараты разных производителей.

На примере препарата метозок методами дискриминантного анализа и линейной регрессии показана возможность контроля содержания действующего вещества в готовых лекарственных формах.