Определение малонового альдегида методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуоресцентной детекцией

Перекисное окисление липидов — окислительная деградация липидов, происходящая, в основном, под действием свободных радикалов. Цель исследования — возможность определения перекисного окисления липидов — главного процесса в развитии атеросклероза — посредством измерения концентрации малонового диальдегида в плазме крови. Окисленные липопротеины крови вызывают изменения в стенках артериальных сосудов. Эти изменения способствуют образованию липидного налета и уплотнению стенок сосудов, что ведет к их дестабилизации, уменьшению просвета кровеносных сосудов и, в конце концов, образованию тромбоза. Материал и методы. Для анализа плазмы крови для определения концентрации малонового диальдегида требуется изократическая система с ВЭЖХ-насосом, инжектором/автосэмплером и флуоресцентным детектором. Условия хроматографического разделения: аналитическая колонка С18 150×4,6 мм, скорость потока 1,0 мл/мин, подвижная фаза вода:метанол (50:50 по объему). Флуоресцентное детектирование проводится при возбуждении на длине волны 515 нм и эмиссии на длине волны 553 нм. Методика пробоподготовки включает в себя этапы осаждения белков плазмы крови и последующей дериватизации аналита. Для ввода в хроматограф для анализа требуется всего 20 мкл обработанной пробы. Результаты. Степень извлечения малонового диальдегида составляет 99%. Элюаты могут храниться в течение 24 ч при комнатной температуре или около 3 дней охлажденными (+2...+8 С). Нижний предел количественного определения составляет 0,01 мкмоль/л. Диапазон линейности 0,01—10 мкмоль/л. Хроматографическое разделение занимает 5 мин. Вывод. Малоновый диальдегид служит маркером оксидативного стресса. Предложенная методика позволяет быстро и точно определить концентрацию малонового диальдегида в плазме крови. Конечный флюорофор детектируется специфично и на очень низких уровнях.