Детский церебральный паралич (ДЦП) занимает одно из ведущих мест в структуре заболеваемости нервной системы у детей. Частота ДЦП остается относительно постоянной в течение последнего десятилетия — от 1,7 до 3,1 на 1000 детского населения [5, 6, 8]. На современном этапе развития медицины не представляются возможными ни внутриутробное прогнозирование ДЦП, ни лечебные мероприятия в антенатальном периоде. До сих пор не существует эффективных методов восстановительного лечения при этом заболевании, особенно в случаях, когда терапия начата несвоевременно и/или имеются диффузные и грубые поражения головного мозга. Поэтому в настоящее время актуально изучение этиологических и патогенетических механизмов реализации патогенных воздействий на нервную систему ребенка.

До настоящего времени неясно, почему в одних случаях наличие комплекса вредных факторов не приводит к каким-либо нарушениям деятельности мозга, а в других — даже легкая асфиксия может привести к развитию грубой церебральной патологии [8—10]. Как правило, необычные ответные реакции проявляются у индивидуумов, которые по генетическому статусу значительно отличаются от общей популяции [1, 4]. Существует предположение, что возникновение заболевания может провоцировать нестабильность генома у зародыша или плода. Обнаружение этого феномена после рождения ребенка и у детей раннего возраста может служить косвенным доказательством стойкости этой патологии при ДЦП, и, следовательно, рассматриваться как постоянно действующий фактор, интегрированный в общую систему патогенеза заболевания. С другой стороны, нельзя исключить существование и обратного механизма, когда в условиях развивающейся патологии определенные патогенетические звенья могут стать причиной повреждения генетического аппарата. Установление феномена нестабильности генома у больных ДЦП может внести существенный вклад как в представления об этиологии и патогенезе этого заболевания, так и в разработку путей восстановительного лечения.

Цель исследования — оценка методами цитогенетики состояния генома у больных ДЦП.

Для выявления цитогенетических аномалий в клетках периферической крови обследовали 49 больных, 28 мальчиков и 21 девочка, в возрасте от 1 года до 3 лет, с разными формами ДЦП.

Критерием включения в исследование явилось наличие признаков перивентрикулярной лейкомаляции при нейровизуализационном обследовании (нейросонография, рентгеновская и магнитно-резонансная компьютерная томография — КТ и МРТ).

Группу контроля составили 10 условно здоровых детей от 1 года до 3 лет.

Больные ДЦП в соответствии с формой заболевания по К.А. Семеновой были разделены на пять групп: спастическая диплегия, двойная гемиплегия, гиперкинетическая форма, лево- и правосторонняя гемипаретическая форма. Каждая группа включала по 10 детей, за исключением группы с двойной гемиплегией, в которой было 9 человек (в связи с гемолизом крови уровень аберраций хромосом (АХ) у 1 больного определить было невозможно).

Для изучения АХ кровь брали при поступлении больного в стационар, до лечения. В контрольной группе исследовали кровь, взятую у здоровых детей при плановых диспансерных обследованиях. Культуру лимфоцитов фиксировали на 48 ч. За 3 ч до фиксации добавляли колхицин в конечной концентрации 0,5 мкг/мл [3]. На каждого обследованного готовили 2 мазка, в каждом — изучалось по 150 метафаз, полученные данные суммировались. Использовали реактивы (фитогемагглютинин, колхицин и красители) фирмы «Sigma». Учитывали все хромосомные и хроматидные аберрации. Гены не регистрировали.

Статистический анализ полученных данных проводили с использованием непараметрических критериев: t-критерий Манна—Уитни и критерии Краскела—Уоллиса. Оценку среднего уровня клеток с перестройками хромосом проводили с использованием медианы (Ме). Нижний и верхний пороговые уровни клеток с цитогенетическими нарушениями определяли как 2,5 и 97,5 перцентили соответственно.

Число лимфоцитов с перестройками хромосом при ДЦП варьировало от 3,33 до 10,0%. Распределение уровня клеток с АХ в лимфоцитах носило асимметричный характер (рис. 1).

Рис. 1. Уровень лимфоцитов с аберрациями хромосом в периферической крови больных ДЦП и здоровых детей.

Примечание. По оси абсцисс — номер пациента, по оси ординат — число клеток АХ (в %). Ромбы — индивидуальные показатели больных ДЦП; затушеванная часть — пороговый уровень числа клеток с АХ у здоровых лиц; Ме К — медиана контрольной группы; МеДЦП — медиана группы больных ДЦП.

Уровень перестроек хромосом у мальчиков и девочек с ДЦП оказался неодинаков (рис. 2).

Рис. 2. Уровень лимфоцитов с аберрациями хромосом в периферической крови мальчиков и девочек с ДЦП.

]]>

Примечание. Представлены 2,5-й, 25-й, 75-й и 97,5-й перцентили соответственно. По оси ординат — уровень АХ (в %). Ме — медиана; верхние и нижние горизонтальные метки представляют 97,5-й и 2,5-й перцентили соответственно; * — достоверные различия на уровне p<0,005.

Анализ числа перестроек хромосом у детей с различными формами заболевания выявил, что минимальные показатели характеризуют больных спастической диплегией — 5,5% (Ме). Наиболее высокий уровень повреждений хромосом наблюдался при двойной гемиплегии (рис. 3).

Рис. 3. Число (в %) лимфоцитов с АХ (ось ординат) у больных с различными формами ДЦП.

]]>

Примечание. Представлены 2,5-й и 25-й, медиана, 75-й и 97,5-й перцентили. * — различия с контролем достоверны (p<0,05); ** — различия с контролем и другими формами ДЦП достоверны на уровне p<0,05.

Оценка уровня АХ у детей с различными формами ДЦП показала, что у всех обследованных регистрируется повышенное (по сравнению с контролем) количество клеток с перестройками хромосом в лимфоцитах крови. Однако при статистической обработке результатов было выявлено, что такое повышение числа хромосомных перестроек наблюдалось лишь у ⅔ больных (см. таблицу).

Таблица

]]>

В зависимости от формы заболевания число детей с нестабильностью генома варьировало от 60% (при гемипаретической форме) до 78% (при двойной гемиплегии).

Таким образом, изучение состояния клеточного генома у больных ДЦП однозначно показало, что у подавляющего большинства обследованных детей происходит дестабилизация генома — повышается число лимфоцитов периферической крови с АХ. У больных ДЦП наблюдается статистически достоверное повышение числа лимфоцитов с АХ по сравнению с контрольной группой здоровых детей. Достоверное превышение числа хромосомных перестроек над спонтанным уровнем АХ наблюдалось примерно у ⅔ больных. Кластогенный эффект коррелирует с полом больного ДЦП — достоверно выше у мальчиков по сравнению с девочками. Нестабильность генома высока у детей со всеми формами заболевания, но достоверно выше в группе детей с самой тяжелой формой двигательных расстройств — двойной гемиплегией. Цитогенетические нарушения в клетках периферической крови свидетельствуют о наличии в патогенезе ДЦП важного звена — неспецифического повреждения генома [2]. Являясь типовым патологическим процессом, оно логически реализуется в нарушении нормальной экспрессии генов, что существенно осложняет течение заболевания, снижает эффективность лечения и делает прогноз крайне неблагоприятным.

Механизмы, дестабилизирующие геном у детей с ДЦП, остаются неуточненными. Можно полагать, что в этом случае имеют место более интенсивные процессы кластогенеза по сравнению со здоровыми детьми. Не исключено, что также феномен нестабильности генома запускает интенсификацию в организме больных ДЦП процессов мутагенеза за счет усиленной генерации эндомутагенов и/или ослабления антимутагенных систем защиты генома [7]. Эти предположения требуют дальнейшего изучения вклада генетической составляющей в патогенез некоторых вариантов ДЦП.

Констатируя нестабильность генома при ДЦП, следует отметить, что полученные данные не дают возможности судить о степени повреждения генома. Чувствительность использованного метода достаточно высока, но повышение численности обследованных может внести определенные коррективы.