Современный научный поиск и внедрение новых бальнеологических факторов в санаторно-курортные рекреационные технологии обусловлены результатами фундаментальных исследований [1-3]. Традиционные нативные природные факторы, такие как лечебные грязи, не всегда возможно использовать при различных ассоциированных патологических состояниях [4]. Санаторно-курортное лечение пациентов с суставной патологией (артриты и артрозы) направлено не только на снятие болевых симптомов, но и на достижение длительной клинической ремиссии, предотвращающей развитие системного воспаления [5, 6]. Поэтому перед экспериментальной курортологией ставятся новые задачи по исследованию малоизученных природных источников, потенциально способных обладать лечебно-профилактическими свойствами [7-9].

Цель исследования - изучить влияние курсового воздействия аппликаций природной желтой глины, грязи озера Тамбукан и бальнеологического средства глинофир на иммунологическую регуляцию при адъювантном артрите (АА).

Исследование было выполнено на 59 крысах - самцах линии Вистар, сопоставимых по массе (180-200 г). Наружное бальнеологическое средство глинофир, разработанное на основе желтой глины Ново-Пятигорского месторождения, изучали в сравнении с тамбуканской грязью и желтой глиной [9]. Курс аппликаций состоял из 12 процедур, сравниваемые бальнеологические средства (тамбуканскую грязь, желтую глину и модифицированную глину в виде глинофира) нагревали до температуры 42 °C и наносили на конечности животных с экспозицией 15-20 мин через 1-2 дня. Инициирование А.А. осуществляли путем однократного введения полного адъюванта Фрейда субплантарно в задние лапы по 0,1 мл. Для изучения бальнеологических факторов использовали специальную схему курсового воздействия (первые 3 процедуры проводили до формирования патологической модели (АА), а последующие 9 - в период перехода из острой в подострую стадию воспаления). Курс аппликаций завершали на 24-й день АА; на 37-й день (хроническая стадия АА) животных выводили из эксперимента. Крысы были распределены следующим образом: в 1-ю группу (контроль; n=9) были включены здоровые животные (интактные); во 2-ю (n=10) - с моделью АА без наружного воздействия; в 3-ю (n=10) - с моделью АА и курсом тамбуканской грязи; в 4-ю (n=10) - с моделью АА и курсом желтой глины (n=10), в 5-ю (n=10) - с моделью АА и курсом модифицированной глины (глинофир).

Для иммунофенотипического анализа лимфоцитов крови применяли метод проточной цитофлуориметрии (аппарат Cytomics FC-500, производитель «Beckman Coulter», США) с использованием антител (anti-Rat) CD3-FITC (маркер Т-лимфоцитов), CD4-PE (маркер Т-хелперов), CD8α-PE (маркер цитотоксических Т-клеток), CD45R-PE (маркер В-лимфоцитов), CD5-FITC (маркер активированных Т-клеток), CD5⁺ I-Ek МНС II-PE (маркер активированные Т-клетки) («eBioscience», США). Для оценки иммунорегуляторного индекса рассчитывали соотношение T-хелперов и цитотоксических T-клеток. Клинические показатели крови животных исследовали унифицированными методами: проводили подсчет лейкоцитов в счетной камере Горяева и определяли лейкоцитарную формулу, используя морфологическую оценку форменных элементов крови. Оценивали уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови на спектрофотометре (СФ-56). Микроскопически определяли поглотительную способность нейтрофилов латексных частиц (фагоцитарное число (ФЧ, усл. ед.) - среднее число частиц латекса, поглощенное одним нейтрофилом, и фагоцитарный индекс (ФИ, %) - доля фагоцитирующих клеток на 100 нейтрофилов). Исследование осуществлялось в соответствии с правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных (приложение к приказу Минздрава СССР № 755 от 12.08.1977) и требованиями Европейской конвенции по защите экспериментальных животных (European Convention for the Protection of Vertebrate Animals used for exsperimental and other scientific purposes. Strasburg: Council of Europe, 1986).

Статистический анализ результатов проводили с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни для сравнения независимых переменных (достоверными считали различия при р<0,05) и множественных межгрупповых сравнений Ньюмана-Кьюлса (средние величины представлены медианой (Ме) и 25-м и 75-м процентилями). Корреляционный анализ проводили с применением метода Спирмена.

В изучении механизмов противовоспалительного действия природных и модифицированных факторов использовали модель АА как наиболее близкую к патогенезу развития локального воспаления в суставах у экспериментальных животных с проявлениями системных иммунопатологических реакций [6]. Хроническая стадия воспаления характеризовалась лейкоцитозом у животных с патологической моделью АА без наружного воздействия и достоверным снижением общего числа лейкоцитов в периферической крови после курса аппликаций с помощью изучаемых бальнеологических факторов (см. рисунок).

По данным иммунофенотипического анализа установлено существенное изменение популяционного состава лимфоцитов в периферической крови в результате моделирования АА: повысилось количество В-лимфоцитов (в 2,5 раза; р<0,02) с одновременным снижением общих Т-лимфоцитов (в 2,5 раза; р<0,05). При этом T-хелперы и цитотоксические T-клетки снижались пропорционально, практически не изменяя их соотношение. Проведенные курсы тамбуканской грязи и глинофира к 37-му дню не влияли на патологически измененное при АА количество Т-лимфоцитов, но при этом появилась тенденция к восстановлению цитотоксических Т-клеток (р<0,2) после аппликаций глинофира (см. таблицу).

Поддерживают иммунологическое воспаление гуморальные факторы, среди которых ЦИК. Их уровень в крови обусловлен механизмами образования и элиминации. В нашем исследовании содержание ЦИК в крови практически не различалось у животных опытных групп с моделью АА без лечения (54 (46-59) усл. ед.), на фоне курса грязевых аппликаций (39 (32-63) усл. ед.), глинофира (39 (33-61) усл. ед.) и у здоровых крыс (48 (26-55) усл. ед.). При использовании аппликаций глинофира между уровнем ЦИК в крови и относительным содержанием B-клеток определялась положительная корреляционная связь (r=0,78; р<0,01) и отрицательная между уровнем ЦИК и относительным (r=–0,71; р<0,07) и абсолютным (r=–0,82; р<0,01) количеством цитотоксических Т-клеток. Применение лечебной грязи способствовало формированию обратной взаимосвязи между соотношением T-хелперов и цитотоксических T-клеток и уровнем ЦИК в периферической крови (r=–0,88; р<0,001). На первых этапах элиминации ЦИК участвуют механизмы фагоцитоза и ретикулоэндотелиальная система печени. В результате моделирования АА изменилась функциональная активность нейтрофилов: в среднем в 2 раза увеличилось (р<0,001) ФЧ при АА (7 (7-7,2) усл. ед.) по сравнению с контрольной группой (3,9 (3,3-4,6) усл. ед.) и на 10% (р≤0,05) - число участвующих в фагоцитозе нейтрофилов при АА (ФИ - 58 (50-59) %) по сравнению с контрольной группой (ФИ - 46 (44-50) %). Повышенное в патологической модели ФЧ нейтрофилов под влиянием бальнеологических факторов снизилось во всех группах, причем наибольший результат отмечался у крыс, получавших аппликации тамбуканской грязи (ФЧ - 5,5 (5,2-5,8) усл. ед.) и глинофира (ФЧ - 5,5 (5,2-5,8) усл. ед.), по сравнению с животными с АА без лечения (р<0,001), а при использовании желтой глины данный показатель (ФЧ 6,5 (5,8-7) усл. ед.) практически не изменился.

Таким образом, при элиминации ЦИК фагоцитоз имеет основное значение, поэтому умеренная активация фагоцитарной активности нейтрофилов позволяет реализовать саногенетические механизмы бальнеологических факторов. Сравнительный анализ эффективности бальнеологических средств показал общую направленность во взаимодействии клеточного и гуморального иммунитетов в реализации противовоспалительного действия тамбуканской грязи и глинофира. Бальнеологические факторы способствуют восстановлению клеточного иммунного ответа, измененного при АА, формируя такие клеточные кооперации, при которых направленно снижается количество патологических иммунных комплексов в крови. Последние снижают гуморальную составляющую воспалительного иммунного процесса при использовании как тамбуканской грязи, так и глинофира.

Конфликт интересов отсутствует.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования: Н.Е., А.К., А.А.

Сбор и обработка материала: А.А.

Статистическая обработка данных: А.А.

Написание текста: А.А., А.К.

Редактирование: Н.Е.