Материал и методы

Работа выполнена на базе клиники болезней уха, горла и носа Первого МГМУ им. И.М. Сеченова. В исследовании принимали участие добровольцы без патологии глотки (n=70), пациенты с ХТ компенсированной формы (n=131), ХТ декомпенсированной формы (n=75) и гранулезным фарингитом (ГФ) (n=58), которые были обследованы с использованием aппаратно-программного комплекса для ЛФС (сертификат для клинического применения №РЗН 2015/2419), включающего лазер с длиной волны излучения λ=405 нм, спектрометр с дифракционной решеткой 1200 штрихов/мм и спектральным разрешением 4 см^–1, оптическую систему фокусировки и фильтрации сигнала, CCD-матрицу, контроллер и компьютер с программным обеспечением для записи спектров. Измерения проводились контактным способом с соблюдением правил антисептики. При анализе данных мы использовали такие показатели и особенности спектров в норме и при патологии, как интенсивность флюоресценции (ИФ), нормированный показатель флюоресценции (НПФ), индекс аэробности (ИА), наличие/отсутствие характерных пиков на определенных длинах волн, характеристика пиков.

Известно, что тело человека имеет метамерное строение, симметричные области иннервируются из одних и тех же ганглиев, а смежные анатомические зоны имеют взаимное влияние на кровоток и иннервацию, поэтому в качестве интактной точки (ИТ) была выбрана асимметричная точка на коже внутренней поверхности предплечья [18]. Нормирование (сравнение) сигнала во всех точках проводилось на ИТ пациента. Если обозначить регистрируемый с поверхности биологического объекта спектр функцией интенсивности от длины волны F=F (x), то интегральный индекс флюоресценции (по всему спектральному диапазону) для функции Intact (ИТ) будет рассчитываться следующим образом:

где Intact — ИТ, в данном случае — кожа внутренней поверхности предплечья исследуемого. При регистрации сигнала от биообъекта у пациентов с патологией глотки мы получили основной (зондирующий) и дополнительный сигналы на длине волны флюоресценции. Последний иллюстрирует характерные изменения, происходящие в тканях при воспалительном процессе. У здоровых добровольцев данный показатель зарегистрирован не был. Помимо характера основного и дополнительного сигналов нами оценивалась также ИФ в диапазоне длин волн от 665 нм (S1) до 700 нм (S2), интегральная интенсивность флюоресценции (ИИФ) в относительных единицах (F). Данные длины волн и показатели были нами выбраны на основании результатов ранее проведенных исследований возможности применения метода ЛФС в различных направлениях клинической медицины и экспериментальной практике [18, 21, 22]. Именно в этом диапазоне длин волн (665—700 нм) регистрируются изменения спектров, характерные для протопорфиринов, в частности протопорфирина IX — флюорохрома, содержащегося в клетках микробов и индикатора микробной обсемененности патологического очага, что позволяет контролировать изменения при воспалительном процессе, проводить качественный и количественный анализ микробного пейзажа патологического очага в конкретный момент времени, оценивать эффективность лечения [18, 23]. В ходе исследований было выявлено, что изучаемые показатели меняются синхронно как в ИТ, так и в исследуемых точках.

Известно, что при хроническом воспалении в тканях изменяется pH и концентрация эндогенных флюорофоров — порфиринов (ПФ), при воспалении их количество может возрастать [21—23]. Повышению количества ПФ в тканях может способствовать повышение не только кислотности среды, но и одного из компонентов, необходимых для синтеза ПФ, — сукцинила СоА, образующегося в ходе катаболизма белков, жиров и углеводов [24]. На рис. 1 приведены

диапазоны длин волн, на которых регистрируются наиболее характерные спектры природных флюорохромов. Согласно данным литературы [23], диапазон флюоресцентной эмиссии ПФ относительно изолирован от такового у других видов флюорохромов, что можно использовать с целью диагностики (см. рис. 1).

На начальном этапе исследования было выявлено, что спектры, полученные с поверхности небных миндалин (НМ) с обеих сторон, имеют практически идентичные характеристики, это свидетельствует о схожем характере кровотока в данной области и о вовлечении симметричных зон в патологический процесс. У каждого пациента с ХТ мы проводили измерения в 4 исследуемых точках, для 3 из них показатели лежали в одном спектральном диапазоне с двух сторон; было взято среднее значение — точка 1 располагалась в области верхнего полюса, точка 2 — в области нижнего полюса, точка 3 — в oбласти устья лакуны НМ, точка 4 — ИТ. У пациентов с ГФ первые 2 точки изменения были аналогичными, также оценивалось среднее значение, а третье измерение проводилось в oбласти наиболее выраженной гранулы лимфоидной ткани задней стенки глотки. У здоровых добровольцев измерение проводилось в тех же точках — в области НМ при сравнении с группой пациентов с ХТ и в области задней стенки глотки при сравнении с группой пациентов с Г.Ф. Нами был рассчитан НПФ — отношение интегралов (площади под спектральной кривой) в исследуемой точке к таковой в ИТ; ИА определялся как отношение интеграла — площади под спектральной кривой на величинах длин волн в диапазоне 665—675 нм одной исследуемой точки к интегралу — площади под кривой в диапазоне 685—695 нм этой же точки. Как И.А., так и НПФ рассчитывались во всех исследуемых точках и сравнивались между собой.

Статистическую обработку полученных данных проводили по общепринятому методу вариационной статистики с вычислением средней арифметической (М), среднего квадратического отклонения (s), ошибки средней арифметической (m). Сравнение непараметрических вариантов после предварительной оценки правильности распределения выборок (соответствия его нормальному распределению) проводилось на основе критерия Стьюдента (t) с вычислением вероятности ошибки (p). При использовании метода ЛФС воспроизводимость исследуемых спектров подтверждали путем регистрации 5—10 спектров, записываемых последовательно с интервалами в 5 с. Ошибка измерений интегральной мощности флюоресценции не превышала ±1,5%. При анализе с использованием методов статистики нами были получены следующие данные: величина «интенсивность флюоресценции в ИТ» распределена достаточно компактно и симметрично, коэффициент асимметрии равен 0,142, коэффициент эксцесса (Kurtosis) равен –0,234, однако наиболее информативными критериями проведения дифференциальной диагностики, согласно данным исследования, были нормированные показатели флюоресценции, а не абсолютные значения «интенсивности флюоресценции в ИТ».

В соответствии с полученными цифрами, обозначенными выше, мы использовали в работе для анализа показателей методы параметрической статистики.

После регистрации спектров проводилась статистическая обработка полученных данных с использованием программы SPSS.