Сайт издательства «Медиа Сфера»
содержит материалы, предназначенные исключительно для работников здравоохранения. Закрывая это сообщение, Вы подтверждаете, что являетесь дипломированным медицинским работником или студентом медицинского образовательного учреждения.

Куртасова Л.М.

Кафедра клинической иммунологии Красноярского государственного медицинского университета им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России, Красноярск, Россия, 660022

Шакина Н.А.

Красноярский краевой центр профилактики и борьбы со СПИДом, Красноярск, Россия, 660045

Лубнина Т.В.

Красноярский краевой центр профилактики и борьбы со СПИДом, Красноярск, Россия, 660045

Николаева А.И.

Кафедра клинической иммунологии Красноярского государственного медицинского университета им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России, Красноярск, Россия, 660022

Иммунологические показатели и энзиматическая активность лимфоцитов периферической крови у детей с гипертрофией глоточной миндалины

Журнал: Вестник оториноларингологии. 2017;82(2): 42‑45

Просмотров : 492

Загрузок : 12

Как цитировать

Куртасова Л.М., Шакина Н.А., Лубнина Т.В., Николаева А.И. Иммунологические показатели и энзиматическая активность лимфоцитов периферической крови у детей с гипертрофией глоточной миндалины. Вестник оториноларингологии. 2017;82(2):42‑45.
Kurtasova LM, Shakina NA, Lubnina TV, Nikolaeva AI. The immunological characteristics and enzymatic activity of lymphocytes from the peripheral blood of the children presenting with pharyngeal tonsillar hypertrophy. Vestnik Oto-Rino-Laringologii. 2017;82(2):42‑45. (In Russ.).
https://doi.org/10.17116/otorino201782242-45

Авторы:

Куртасова Л.М.

Кафедра клинической иммунологии Красноярского государственного медицинского университета им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России, Красноярск, Россия, 660022

Все авторы (4)

Эпидемиологические исследования, проведенные в Российской Федерации, показали неуклонный рост числа детей с заболеваниями органов лимфоглоточного кольца, в частности с воспалением и увеличением в размерах глоточной миндалины (ГГМ) — от 20 до 50% детской популяции [1—3]. Одной из основных причин в развитии воспаления глоточной миндалины у детей является воздействие бактериальной и вирусной флоры на слизистую оболочку в условиях измененной иммунологической реактивности организма.

В настоящее время доказано, что в основе функциональной активности лимфоцитов — основного структурно-функционального элемента иммунной системы — лежат их метаболические реакции. Так, с первых минут реакции бласттрансформации лимфоцитов увеличивается потребление АТФ [3—5]. Через 1—2 ч активируется митохондриальное дыхание лимфоцитов, что позволяет клеткам перейти на более высокий энергетический уровень, и синтез АТФ начинает преобладать над его потреблением [6, 7].

Установлена зависимость экспрессии на лимфоцитах крови СD4+— и СD8+-антигенов от внутриклеточной концентрации аденозина и аденозиндифосфорной кислоты [5, 8].

Выявлено, что глутатион может непосредственно модулировать пролиферацию Т-лимфоцитов [9, 10].

Особенно высокой информативностью для исследования метаболизма лимфоцитов обладают окислительно-восстановительные ферменты. Это связано с тем, что, являясь переносчиками электронов в клетке, они осуществляют ключевые реакции метаболизма и координируют сопряженные метаболические пути.

Цель исследования — изучение иммунологических параметров и показателей активности НАД (Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах периферической крови у детей раннего возраста с гипертрофией глоточной миндалины.

Пациенты и методы

Обследованы 57 детей в возрасте от 1 года до 3 лет (средний возраст 2,26±0,76 года) с ГГМ, из них 32 (56,14%) мальчика и 25 (43,86%) девочек.

Критериями включения в исследование являлись: возраст 1—3 года; ГГМ II, III степени; европеоидная раса; отсутствие терапии в течение месяца, предшествующего обследованию.

Критерии исключения из исследования: нормальная аэрация полости носа; ГГМ I степени; наличие сопутствующих заболеваний (наследственных, аллергических, аутоиммунных и пр.).

Диагноз ГГМ был установлен на основании жалоб и клинической картины: затруднение носового дыхания, дыхание через рот, отделяемое из носа, храп в ночное время; эндоскопической картины: наличие аденоидных вегетаций II, III степени в полости носоглотки.

Контрольную группу составили 35 практически здоровых детей в возрасте 1—3 года (средний возраст 2,14±0,84 года), из них 19 (54,29%) мальчиков и 16 (45,71%) девочек. Мононуклеары выделяли из цельной гепаринизированной крови центрифугированием в градиенте плотности фиколл—верографин [11]. Методом проточной цитофлуориметрии, используя FACS-Callibur («Becton Dickinson», США) и реагенты Simul Test IMK-lymphocyte Kit (США), определяли количество СD3+-, СD4+-, СD8+-, СD16+/56+-, СD19+-клеток в периферической крови.

Концентрацию иммуноглобулинов классов А, M, G в сыворотке крови оценивали методом радиальной иммунодиффузии в геле [12]. Содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови исследовали в реакции с полиэтиленгликолем [13].

В лимфоцитах периферической крови осуществляли биолюминесцентное определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ), глицерол-3-фосфатдегидрогеназы (Г3ФДГ), НАД- и НАДН-зависимой лактатдегидрогеназы (НАДЛДГ и НАДНЛДГ соответственно), НАД- и НАДН-зависимой малатдегидрогеназы (НАДМДГ и НАДНМДГ соответственно), НАД- и НАДН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДГДГ и НАДНГДГ соответственно), НАДФ- и НАДФН-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДФГДГ и НАДФНГДГ соответственно), НАД- и НАДФ-зависимой изоцитратдегидрогеназы (НАДИЦДГ и НАДФИЦДГ соответственно), малатдегидрогеназы декарбоксилирующей (НАДФМДГ) и глутатионредуктазы (ГР) [14].

Активность исследуемых оксидоредуктаз выражали в ферментативных единицах (1Е=1 мкмоль/мин) на 104 клеток. Исследование проводили на ферментативном препарате NAD (P): FMN оксидоредуктаза-люцифераза из Photobacteriumleiognathi (получен в Институте биофизики РАН, Красноярск). Измерение уровня биолюминесценции осуществляли на биолюминометре «БЛМ 8801» (Россия).

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием программы Statistica v. 6.0 («Stat Soft Ins.», США). Нормальность распределения показателей определялась с помощью метода Колмогорова—Смирнова. Количественные показатели, учитывая нормальное распределение, описывались с использованием средних арифметических значений (М) и стандартной ошибки среднего (±m). Для изучения статистической значимости различий между количественными признаками представленных групп применяли t-критерий Стьюдента. Критический уровень значимости (p) при проверке статистических гипотез принимали равным 0,05.

Результаты и обсуждение

Анализ полученных данных показал статистически значимое повышение процентного содержания лимфоцитов в периферической крови у детей с гипертрофией глоточной миндалины по сравнению с аналогичными показателями в контрольной группе (табл. 1).

Таблица 1. Иммунологические показатели у детей с гипертрофией глоточной миндалины (M±m) Примечание. р — статистически значимые различия между показателями основной и контрольной групп.

Изучение иммунофенотипа лимфоцитов периферической крови обнаружило выраженную тенденцию к понижению процентного содержания СD4+-клеток и статистически значимое увеличение абсолютного числа СD8+-клеток и снижение процентного содержания СD16+/56+-клеток периферической крови в группе детей с ГГМ по сравнению с параметрами контрольной группы (см. табл. 1).

Реакция гуморального звена иммунитета характеризовалась снижением концентрации IgA в сыворотке крови в группе детей с ГГМ относительно показателей контрольной группы (р<0,01). Следует отметить статистически значимое повышение уровня ЦИК в сыворотке крови у детей с ГГМ по сравнению с контролем (см. табл. 1).

Результаты проведенных исследований позволили установить, что в группе детей с ГГМ имеют место изменения показателей активности НАД (Ф)-зависимых дегидрогеназ в лимфоцитах периферической крови (табл. 2). Так, в лимфоцитах крови в группе детей с ГГМ наблюдается повышение активности Г6ФДГ, что определяет интенсификацию в клетке пластических процессов, зависящих от продуктов пентозофосфатного цикла [15, 16]. Однако увеличение оттока интермедиатов на реакции пластического обмена вызывает снижение интенсивности субстратного потока по гликолизу, что выражается в пониженном уровне анаэробной реакции ЛДГ. В качестве компенсаторной реакции, направленной на активацию интенсивности анаэробного окисления глюкозы в группе детей с ГГМ, можно рассматривать повышение активности Г3ФДГ-фермента, осуществляющего перенос продуктов липидного катаболизма на окислительно-восстановительные реакции гликолиза [17].

Таблица 2. Показатели активности НАД (Ф)-зависимых дегидрогеназ (мкЕ) в лимфоцитах периферической крови у детей с гипертрофией глоточной миндалины (М±m) Примечание. p — статистически значимые различия между показателями основной и контрольной групп.

Сниженный уровень гликолиза в лимфоцитах периферической крови у детей с ГГМ определяется понижением активности анаэробной реакции ЛДГ и выраженной тенденцией к снижению НАДН-зависимой реакции МДГ (см. табл. 2). Снижение на этом фоне активности аэробной реакции ЛДГ, вероятно, свидетельствует о более экономном использовании клеткой наработанного пирувата.

Состояние митохондриального компартмента в лимфоцитах периферической крови у детей с ГГМ характеризуется повышением активности НАДИЦДГ, НАДМДГ, а также увеличением активности вспомогательной (НАДФИЦДГ) и шунтирующей (НАДФМДГ) реакцией и сниженным уровнем оттока интермедиатов цикла Кребса на реакции аминокислотного обмена через НАДН- и НАДФН-зависимые глутаматдегидрогеназы (см. табл. 2). Следовательно, у детей с ГГМ в лимфоцитах крови отмечается повышенная интенсивность субстратного потока по циклу трикарбоновых кислот, вносящему наибольший вклад в процессы внутриклеточного энергообразования.

В то же время интенсивность субстратного взаимодействия цикла Кребса с реакциями аминокислотного обмена снижена. Так, установлено снижение активности НАД- и НАДФ-зависимых глутаматдегидрогеназ, осуществляющих перенос субстратов на реакции лимонного цикла (см. табл. 2).

Следует отметить пониженный уровень ГР в лимфоцитах крови у детей с ГГМ, что отражает снижение активности глутатионзависимой антиоксидантной системы клетки [18].

Заключение

Результаты проведенного исследования показали, что в группе детей с ГГМ на фоне повышенного процентного содержания лимфоцитов в периферической крови отмечаются изменения их иммунофенотипического спектра, а также снижение концентрации IgA и повышение уровня ЦИК в сыворотке крови.

Кроме того, обнаружено изменение метаболической активности лимфоцитов периферической крови, которые характеризуются повышением активности рибозо-5-фосфат и НАДФН-зависимых пластических процессов, снижением гликолиза и повышением интенсивности аэробных дыхательных процессов как на начальных, так и на терминальных стадиях цикла трикарбоновых кислот, понижением глутатионзависимой антиоксидантной защиты клетки.

Конфликт интересов: авторы статьи подтвердили отсутствие финансовой поддержки/конфликта интересов, о которых необходимо сообщить.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail