Сравнительная иммуногистохимическая характеристика глоточной миндалины при разной степени экологической нагрузки

Гиперплазия глоточной миндалины вносит существенный вклад в патологию ЛОР-органов у детей. Морфологическому изучению аденоидных вегетаций посвящено большое число работ. В то же время иммуногистохимические исследования весьма немногочисленны. Достаточно подробно с применением данного метода описано только состояние микроциркуляторного русла [1, 2]. В то же время глоточная миндалина является периферическим органом иммунной системы и отвечает на различные патологические воздействия специфическими иммуноморфологическими реакциями [3]. В настоящее время ни у кого не вызывает сомнений, что состояние иммунной системы во многом определяется экологическими факторами. Изменения глоточной миндалины также могут быть связаны с влиянием загрязняющих атмосферу веществ [4].

Среди населения, в первую очередь детского, в районах с высокой антропотехногенной нагрузкой увеличивается частота ЛОР-заболеваний. Однако гистологические исследования лимфоидной ткани носоглотки с применением моноклональных антител в зависимости от экологического воздействия в доступной нам литературе отсутствуют. Не проводился также и морфометрический анализ, позволяющий получить статистически достоверные результаты.

Цель настоящей работы — сравнительное комплексное иммуноморфологическое исследование ткани глоточной миндалины детей, проживающих в районах Республики Татарстан (РТ) с разной степенью экологической нагрузки.

Было изучено 100 операционных образцов гиперплазированной ткани аденоидных вегетаций. Все наблюдения были разделены на три группы. В 1-й группе (n=20) исследовались глоточные миндалины детей, проживающих в районах РТ с низкой степенью загрязнения воздушного бассейна, во 2-й (n=48) — со средним уровнем загрязнения, в 3-й (n=32) — с высокой степенью загрязнения атмосферного воздуха.

Фиксацию образцов проводили в 10% нейтральном формалине по Лилли или жидкости Боуэна. После соответствующей проводки [5] материал заливали в парафин. Гистологические срезы окрашивали гематоксилином, эозином и пикрофуксином по Ван-Гизону.

Иммуногистохимическое исследование проводили с помощью набора моноклональных антител (МКАТ), характеристика которых представлена в табл. 1.

Связывание антител с клеточными и структурными элементами определяли при помощи стандартного биотин-стрептавидин-пероксидазного метода (DAKO: LSAB + System-HRP, код K0690) с диаминобензидином в качестве хромогена [6]. Срезы заключали в канадский бальзам или в специальные среды фирмы DAKO (Ultramount, Faramount, код S302580−2).

Иммуногистохимические реакции в структурных и клеточных элементах глоточной миндалины оценивали с учетом интенсивности и процента окрашенных клеток [7]. В каждом случае подсчитывали 100 клеток. Критерии иммуногистохимического окрашивания представлены в табл. 2.

Кроме того, на гистологических препаратах проводили морфометрическое изучение ряда структурных компонентов миндалины при помощи морфометрической сетки случайного шага [8]. Измерялись площади различных типов эпителиальной выстилки, лимфоидных фолликулов без светлых (реактивных) центров и с их наличием, кровеносных сосудов, соединительной ткани.

Полученные данные были обработаны статистически с вычислением критерия Стьюдента и величины p (достоверность различий).

Как показали наши исследования, во всех случаях имелись морфологические изменения глоточной миндалины, выраженность которых была различной, что касалось в той или иной степени всех ее структурных компонентов: эпителиальной выстилки, лимфоидной ткани, а также стромы и сосудов.

Для всех групп наблюдений были характерны микроциркуляторные расстройства. В 1-й группе общая площадь кровеносного микроциркуляторного русла составляла 5,10±0,53% (табл. 3).

Как правило, имелись выраженное полнокровие и расширение просвета сосудов или их неравномерное кровенаполнение. Сосудистые стенки были отечны, иногда с явлениями плазматического пропитывания или мукоидного набухания. Имел место выход форменных элементов крови за пределы сосудов. Эндотелиальная выстилка, судя по экспрессии CD31, в этой группе существенно не менялась. Кровеносные сосуды были с неповрежденной базальной мембраной, которая при реакции с МКАТ к коллагену IV контурировалась в виде непрерывной тонкой полосы.

Во 2-й группе микроциркуляторные расстройства были выражены сильнее. Площадь кровеносного микроциркуляторного русла увеличивалась до 6,73±0,28%, что происходило не только за счет расширения просвета сосудов, но и увеличения их количества, особенно мелких капилляров в субэпителиальной области. Кроме того, МКАТ к CD31 выявляли набухание эндотелия. В этой же группе имелись неравномерное окрашивание и очаговые утолщения базальной мембраны, судя по экспрессии МКАТ к коллагену IV. В ряде случаев наблюдался склероз сосудистых стенок.

В 3-й группе экстраваскулярно встречались уже не только отдельные эритроциты, но и участки обширных кровоизлияний. Судя по экспрессии CD31, имело место не только набухание эндотелия, но и десквамация его в просвет сосудов. Были характерны расщепление и фрагментация базальных мембран, что выявлялось МКАТ к коллагену IV.

Кроме того, в миндалинах этой группы имелись как склероз стенок сосудов, так и периваскулярные разрастания соединительной ткани. Этим объясняется и уменьшение площади кровеносного микроциркуляторного русла в этой группе до 3,01±0,42%.

Следует отметить, что в процесс вовлекались не только кровеносные, но и лимфатические сосуды. Во 2-й группе имело место их расширение с явлениями лимфостаза в отдельных сосудах, а в 3-й — склероз и выраженный лимфостаз практически во всех сосудах (рис. 1).

Реакция лимфоидной ткани проявлялась прежде всего гиперплазией лимфоидных фолликулов с появлением крупных светлых (реактивных) центров, площадь которых в 1-й группе составляла 48,76±2,97%. При этом фолликулы, расположенные под эпителием, были самыми крупными и имели наиболее выраженные реактивные центры. Такие фолликулы всегда имели отчетливую мантийную зону из малых лимфоцитов, толщина которой была больше на стороне, обращенной к эпителиальной выстилке. Иногда гиперплазированные фолликулы занимали практически всю площадь среза миндалины.

Иммуногистохимический анализ при этом показывал увеличение в них экспрессии МКАТ к CD20 — маркера В-лимфоцитов, а в ряде наблюдений — МКАТ к CD68 — маркера макрофагов (рис. 2, табл. 4). В последнем случае при рутинных окрасках наблюдалась так называемая картина «звездного неба». Кроме того, как В-клетки, так и макрофаги в той или иной степени диффузно располагались во всех структурных компонентах миндалины, инфильтрируя иногда эпителиальную выстилку. Это было характерно и для CD3 (+) Т-клеток, которые также обнаруживались повсеместно, хотя и в меньшем количестве, чем В-лимфоциты. Следует отметить преобладание лимфоцитов с В-клеточным фенотипом над элементами, экспрессирующими Т-клеточный маркер.

Сравнение исследуемых групп показало, что во 2-й группе гиперпластическая фолликулярная реакция в целом сохранялась (49,01±2,11%), однако чаще встречались крупные фолликулы со слабовыраженными или размытыми светлыми центрами, либо вообще без таковых. Площадь, занимаемая последними, была больше, чем в 1-й группе — 5,34±0,73%. Иногда имело место истончение мантийной зоны. При этом в фолликулах снижалась экспрессия МКАТ к CD20- и CD68-антигенам. Параллельно в интерфолликулярных зонах, судя по реакции с МКАТ к CD3, уменьшалось и количество Т-клеток.

Часто во 2-й группе в лимфоидной ткани миндалины обнаруживались участки склероза и очаговое разрежение клеточных элементов. Объем соединительной ткани возрастал по сравнению с 1-й группой до 17,04±1,01%.

В 3-й группе имело место уменьшение площади лимфоидных фолликулов со светлыми центрами до 41,72±1,92%. В ряде наблюдений встречались мелкие, редуцированные фолликулы, без светлых центров, иногда с явлениями деструкции, уменьшением в них количества лимфоцитов и оголением ретикулярной стромы. Мантийная зона у таких образований либо не определялась, либо была истонченной.

Значительно снижалась интенсивность иммуногистохимических реакций, что прежде всего касалось маркеров CD20, CD3 и CD68.

В некоторых случаях в этой группе имело место стирание рисунка миндалины, полное отсутствие фолликулов, резкое уменьшение общего количества клеток с образованием запустевших участков. В других наблюдениях преобладали склеротические процессы с диффузным разрастанием соединительнотканных волокон, окружавших отдельные островки лимфоидной ткани. Площадь соединительной ткани в 3-й группе увеличивалась до 23,18±0,93%.

Иммуногистохимические окраски, за исключением панцитокератинов и CD31, при этом были слабовыраженными, а МКАТ против CD3 иногда вообще давали отрицательную реакцию.

Определенные различия между исследуемыми группами наблюдались в эпителиальной выстилке миндалины. В 1-й группе эпителиальный покров был в основном представлен многослойным плоским неороговевающим эпителием (4,12±0,23% от общей площади среза) (рис. 3). В углублениях или складках миндалины он часто имел структуру однослойного многорядного (0,89±0,15%).

Иммуногистохимически во всем эпителиальном пласте экспрессировались панцитокератины, а в его базальной мембране — коллаген IV. Как уже указывалось, эпителий часто был инфильтрирован клеточными элементами с фенотипом Т- и В-клеток, а также макрофагов.

Во 2-й группе несколько увеличивалась площадь многорядного эпителия (до 1,93±0,20%), который иногда обнаруживался и на гребнях складок миндалины. Иммуногистохимический анализ выявил сохранение экспрессии панцитокератинов и коллагена IV. Однако в ряде наблюдений МКАТ против последнего выявляли неравномерное окрашивание и утолщение базальной мембраны.

В 3-й группе, кроме многослойного плоского неороговевающего и однорядного эпителия, иногда встречались гиперплазированные участки слизистой оболочки с неопределенной гистологической структурой, занимающие до 1,94±0,21% площади среза миндалины. Иногда, напротив, имела место десквамация эпителия с оголением гребней складок. Экспрессия панцитокератинов в этой группе в целом сохранялась, но МКАТ против коллагена IV часто выявляли деструкцию базальной мембраны эпителия на многих участках.

Морфологические изменения глоточной миндалины у детей при ее клинической гиперплазии зависят от степени экологической нагрузки. Лимфоидная ткань отвечает на воздействие экопатологических факторов как неспецифическими стромально-сосудистыми, так и специфическими иммуноморфологическими реакциями. Первые реализуются в виде микроциркуляторных расстройств с последующим склерозом, вторые — в снижении интенсивности местного иммунного ответа за счет инактивации Т- и В-клеточного его звеньев, а также моноцитарно-макрофагальной системы.

Подобные процессы, во многом аналогичные инволютивным, способствуют переходу пролиферативно-гиперпластической стадии процесса в фиброзно-склеротическую.