Деменков В.Р.

Кафедра оториноларингологии Луганского государственного медицинского университета

Фролов В.М.

Кафедра общей хирургии и кафедра инфекционных болезней с эпидемиологией Луганского государственного медицинского университета

Пересадин Н.А.

Кафедра общей хирургии и кафедра инфекционных болезней с эпидемиологией Луганского государственного медицинского университета

Круглова О.В.

Кафедра инфекционных болезней с эпидемиологией Луганского государственного медицинского университета;
Отдел экологической генетики и клинической иммунологии Украинского научного центра медицинской генетики НАН, ­Луганск

Влияние циклоферона на цитокиновый профиль крови и продукцию провоспалительных цитокинов в культурах мононуклеаров периферической крови больных хроническим тонзиллитом

Журнал: Вестник оториноларингологии. 2012;77(4): 73‑76

Просмотров : 205

Загрузок : 2

Как цитировать

Деменков В.Р., Фролов В.М., Пересадин Н.А., Круглова О.В. Влияние циклоферона на цитокиновый профиль крови и продукцию провоспалительных цитокинов в культурах мононуклеаров периферической крови больных хроническим тонзиллитом. Вестник оториноларингологии. 2012;77(4):73‑76.
Demenkov VR, Frolov VM, Peresadin NA, Kruglova OV. Influence of сycloferon on the сytokine blood profile and production of proinflammatory сytokines in the cultures of mononucleares of peripheral blood of the patients with chronic tonsillitis. Vestnik Oto-Rino-Laringologii. 2012;77(4):73‑76. (In Russ.).

Авторы:

Деменков В.Р.

Кафедра оториноларингологии Луганского государственного медицинского университета

Все авторы (4)

В настоящее время хронический тонзиллит (ХТ) является одной из наиболее важных проблем современной оториноларингологии, что вызывает повышенный интерес к изучению его патогенеза [1—3]. Так, существенное внимание уделяется сдвигам цитокинового профиля крови (ЦПК) у больных с ХТ и другой патологией ЛОР-органов [4]. В работах последних лет особенности клинического течения и исходов ХТ соотносят с иммунным статусом больных хронической тонзиллярной патологией и динамикой иммунологических показателей под влиянием проводимого лечения [5]. Так, наблюдающееся за последнее время существенное возрастание частоты возникновения гнойно-некротических осложнений ХТ связывают с наличием вторичных иммунодефицитных состояний, в том числе на фоне сахарного диабета и ожирения [6]. Именно иммунным нарушениям у больных ХТ придается наиболее важное значение в патогенезе формирования как тонзиллярной патологии, так и ее осложнений [7, 8].

В наших предыдущих исследованиях конкретизированы некоторые основные механизмы иммунологических расстройств в патогенезе ХТ и повторных ангин [9—12]. В ходе разработки рациональных подходов к патогенетически обоснованной терапии больных с обострениями ХТ было установлено, что применение общепринятых медикаментозных препаратов, и прежде всего антибиотиков, при лечении больных с данной патологией не только не обеспечивает восстановление иммунологического гомеостаза, но, напротив, может способствовать усугублению иммунодефицита [5, 12].

При разработке патогенетически обоснованных подходов к терапии ХТ наше внимание привлекла возможность использования современного иммунотропного препарата циклоферона (производство ООО «Полисан», РФ), который обладает также противовоспалительной активностью [13].

Циклоферон — препарат, который относится к гетероароматичным соединениям класса акридионов, обладающий интерферониндуцирующими свойствами [13]. В экспериментальных условиях и клинических исследованиях установлена способность циклоферона регулировать антителообразование, естественную киллерную активность Т-лимфоцитов и стимулировать фагоцитоз, что сочетается с выраженным противовоспалительным эффектом препарата. Иммуномодулирующий эффект циклоферона проявляется в коррекции иммунного статуса организма при иммунодефицитных состояниях различного генеза, при этом в зависимости от типа нарушений имеет место активация тех или других звеньев иммунной системы [14]. Известны отдельные работы, касающиеся оценки эффективности местного применения циклоферона в профилактике обострений ХТ и синуситов [15], однако механизмы его фармакологического действия у больных ХТ остаются недостаточно изученными.

Цель настоящей работы — оценка эффективности современного иммунотропного препарата циклоферона при лечении больных ХТ.

Материал и методы

Под наблюдением было 88 больных с обострениями ХТ, из них 40 мужчин и 48 женщин в возрасте от 19 до 56 лет. С учетом существенной роли бактериологических исследований в диагностике ХТ [16] и ведущей роли стрептококковой инфекции в тонзиллярной патологии [17] нами были отобраны пациенты с установленным этиологическим диагнозом ХТ. При проведении бактериологического исследования содержимого лакун небных миндалин были выделены следующие возбудители: Str. рyogenes — 45 (51,1%) штаммов, Str. angunosus — 24 (27,3%) культуры, Str. viridans — 19 (21,6%) штаммов.

Обследованные больные были объединены в две группы — 1-ю (основную — 46 лиц) и 2-ю (контрольную — 42 пациента), рандомизированные по полу, возрасту, тяжести течения обострения и этиологии ХТ. Лечение пациентов обеих групп включало антибактериальные препараты (антибиотики пенициллинового ряда или цефалоспорины (при отсутствии в анамнезе аллергических реакций); противовоспалительные (мефенаминовая кислота) и антигистаминные препараты (цетрин, лоратидин, фенкарол и др.), аскорутин или аскорбиновую кислоту [11]. В основной группе пациентов дополнительно к общепринятой терапии назначали циклоферон внутримышечно в виде 12,5% раствора по 2 мл 1 раз в день на протяжении 5 дней подряд, далее по 2 мл через день осуществляли еще 5—7 инъекций препарата. При необходимости в дальнейшем в амбулаторных условиях использовали поддерживающую дозу циклоферона — по 150 мг препарата 2 раза в неделю внутрь на протяжении 2—4 нед.

Для реализации цели исследования в обеих группах обследованных изучали уровень провоспалительных цитокинов (ЦК) — IL-1β и TNFα, а также их продукцию в системе in vitro. Определение концентрации IL-1β и TNFα в сыворотке крови и в надосадочной жидкости культур мононуклеаров после ее центрифугирования осуществляли методом иммуноферментного анализа (ИФА) на иммуноферментном анализаторе PR2100 фирмы «Sanofi Diagnostic Pasteur» (Франция) с использованием наборов для ИФА производства ООО «Протеиновый контур» (РroCon) (СПб, Россия) — РroConIL-1β и РroConTNFα [18]. Инкубация клеточной суспензии мононуклеаров периферической крови с концентрацией клеток 1,5·106/мл среды осуществлялась в течение суток в СО2-инкубаторе при температуре +30 °С [19]. При этом инкубация каждой клеточной культуры проводилась в двух вариантах: без стимуляции (для определения спонтанной продукции ЦК) и со стимуляцией фитогемагглютинином (ФГА). Статистическую обработку полученных цифровых данных осуществляли на персональном компьютере Intel Core 2 Duo с использованием одно- и многофакторного дисперсионного анализа (применялись пакеты лицензионных программ Microsoft Windowsxp professional, Microsoft Office 2007, Microsoft Excel Stadia 6.1 Statistica); при этом учитывались принципы использования статистических методов в оценке клинической эффективности лекарственных средств [20].

Результаты и обсуждение

При проведении иммунологических исследований на фоне клинической манифестации обострения ХТ установлено, что содержание изученных провоспалительных ЦК в сыворотке крови пациентов обеих групп до начала лечения было существенно повышенным. Так, при норме концентрации TNFα 39,6±2,1 пг/мл, в этот период обследования уровень TNFα в сыворотке составлял у больных 1-й группы 216,5±9,4 пг/мл, т.е. был повышен в среднем в 5,47 раза (p<0,001), а во 2-й группе — 208,6±8,6 пг/мл, что в 5,27 раза превышало норму (p<0,001). Уровень IL-1β в сыворотке крови при норме 18,8±1,3 пг/мл был повышен в основной группе в среднем в 4,6 раза относительно нормы и составлял 86,5±3,6 пг/мл (p<0,001), в группе сопоставления концентрация IL-1β была повышена в 4,44 раза относительно нормы и равнялась при этом 82,7±3,5 пг/мл (p<0,001).

Спонтанная продукция IL-1β в культуре мононуклеаров у больных ХТ 1-й группы была повышена в среднем в 6,17 раза относительно нормы (p<0,001) и составляла в среднем 227,3±4,6 пг/мл, во 2-й группе уровень спонтанной продукции IL-1β был в 5,93 раза выше нормы (p<0,001) и равнялся 218,1±5,4 пг/мл. При стимуляции ФГА продукции IL-1β уровень данного ЦК в надосадочной жидкости увеличивался у больных ХТ 1-й группы в среднем в 1,2 раза по сравнению с исходной концентрацией (p<0,05), во 2-й группе — в 1,27 раза (p<0,05). При этом содержание IL-1β в надосадочной жидкости культур мононуклеаров у больных 1-й группы превышало норму в 2,56 раза (p<0,001), а во 2-й группе — в 2,62 раза (p<0,001). Поскольку у практически здоровых лиц кратность увеличения продукции IL-1β мононуклеарами при стимуляции ФГА составляла 2,88±0,12 раза, можно считать, что при существенном повышении исходной спонтанной продукции данного ЦК ответ на стимуляцию мононуклеаров введением в клеточную культуру ФГА у больных ХТ был существенно снижен — в среднем в 2,4±0,12 раза в 1-й группе (p<0,001) и в 2,27±0,11 раза во 2-й группе (p<0,001).

Аналогичная тенденция была выявлена при изучении способности клеточных культур мононуклеаров периферической крови больных ХТ к синтезу TNFα. Уровень спонтанной продукции данного ЦК в основной группе был в 2,88 раза выше нормы (p<0,001) и составлял в среднем 140,2±4,2 пг/мл, в группе сопоставления спонтанная продукция TNFα была в 2,8 раза выше нормы и достигала 136,7±4,8 пг/мл (p<0,001). При стимуляции продукции TNFα путем введения ФГА в клеточную культуру мононуклеаров уровень данного ЦК в надосадочной жидкости увеличивался у больных 1-й группы в среднем в 2,26 раза по сравнению с исходной концентрацией (p<0,001), у больных 2-й группы — в 2,35 раза (p<0,001). У больных ХТ 1-й группы уровень данного ЦК составлял в среднем 316,4±3,5 пг/мл, что было в 2,2 раза выше нормы (p<0,001), у больных 2-й группы — в среднем 320,6±2,4 пг/мл, что превышало норму в 2,25 раза (p<0,001). Поскольку у практически здоровых лиц кратность увеличения спонтанной продукции TNFα в клеточных культурах мононуклеаров составляет 2,9±0,12 раза, выявлено достоверное увеличение спонтанной продукции этого ЦК у больных ХТ, что характерно для заболеваний с наличием хронического воспалительного процесса [21]. В то же время ответ на стимуляцию мононуклеаров больных ХТ неспецифическим митогеном (ФГА) можно считать существенно сниженным, поскольку кратность увеличения концентрации TNFα в ответ на стимуляцию ФГА в 1-й группе была ниже нормы в 1,3 раза (p<0,05) и во 2-й группе — в 1,29 раза (p<0,05).

Было установлено позитивное влияние иммуноактивного препарата циклоферона на уровень провоспалительных ЦК у больных ХТ. Так, в 1-й группе больных, которые получали циклоферон, отмечено снижение содержания TNFα и IL-1β в сыворотке крови до верхней границы нормы (p>0,05). При этом концентрация TNFα на момент завершения лечения с применением циклоферона составляла в среднем 45,1±2,5 пг/л, т.е. в ходе лечения снижалась в 4,8 раза (p<0,001). Во 2-й группе в процессе терапии обострения ХТ концентрация TNFα снижалась в среднем в 3,7 раза по сравнению с исходным показателем, однако при этом оставалась достоверно выше нормы в 1,42 раза (p<0,05), составляя при этом 56,4±2,1 пг/мл. Уровень TNFα в этот период обследования в сыворотке крови у больных 1-й группы был в среднем в 1,25 раза ниже, чем у пациентов 2-й группы (p<0,05) и соответствовал верхней границе нормы.

Концентрация IL-1β в сыворотке крови на момент завершения лечения у больных 1-й группы равнялась в среднем 24,6±2,5 пг/мл, т.е. снижалась по сравнению с исходным уровнем в 3,5 раза (p<0,001) и при этом достигала верхней границы нормы. Во 2-й группе уровень IL-1β в сыворотке крови снижался в ходе лечения в 2,0 раза, однако составлял 41,4±2,3 пг/мл, т.е. сохранялся на уровне, превышавшем норму в 2,2 раза (p<0,01). В целом на момент завершения лечения уровень IL-1β в сыворотке крови больных 1-й группы (которая получала циклоферон) был в среднем в 1,68 раза ниже, чем у пациентов 2-й группы (p<0,05).

В ходе лечения у больных 1-й группы спонтанная продукция IL-1β в культурах мононуклеаров снижалась по сравнению с исходным уровнем в среднем в 5,7 раза и составляла 39,9±1,5 пг/мл, что не отличалось от нормы (p>0,05). Стимулируемая продукция IL-1β у пациентов 1-й группы на момент завершения терапии уменьшалась в среднем в 2,37 раза и составляла 114,7±2,8 пг/мл, что соответствовало верхней границе нормы (p>0,05). У больных 2-й группы спонтанная продукция IL-1β снижалась в ходе терапии в 3,65 раза и составляла при этом 59,8±2,2 пг/мл, что, однако, превышало соответствующий показатель нормы в среднем в 1,63 раза (p<0,05). Стимулируемая ФГА продукция IL-1β в культурах мононуклеаров больных ХТ 2-й группы на момент завершения лечения составляла в среднем 84,8±1,9 пг/мл, что было в 3,28 раза меньше исходного значения данного показателя и одновременно в 1,25 раза ниже уровня IL-1β у пациентов 1-й группы (p<0,05).

На момент завершения лечения у больных ХТ 1-й группы уровень спонтанной продукции TNFα составлял 51,9±1,6 пг/мл, что достоверно от нормы не отличалось (p<0,05). В то же время у пациентов 2-й группы этот показатель равнялся 64,4±1,8 пг/мл, что превышало норму в 1,33 раза (p<0,05). Стимулируемая ФГА продукция TNFα в культурах мононуклеаров периферической крови больных 2-й группы на момент завершения лечения равнялась в среднем 88,1±2,2 пг/мл, что было в 3,44 раза ниже исходного уровня и в 1,69 раза ниже соответствующего показателя в 1-й группе (p<0,01).

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что включение современного иммуноактивного препарата циклоферона у больных ХТ патогенетически обоснованно и клинически перспективно, поскольку его применение способствует нормализации концентрации провоспалительных ЦК (TNFα, IL-1β) в сыворотке крови и их продукции в культурах мононуклеаров периферической крови пациентов.

Выводы

1. При проведении иммунологических исследований в периоде обострения ХТ установлено повышение содержания провоспалительных ЦК (TNFα, IL-1β) в сыворотке крови. Одновременно выявлено повышение спонтанной продукции данных ЦК в культурах мононуклеаров периферической крови.

2. Включение циклоферона в число средств лечения обострения ХТ обусловило снижение содержания TNFα и IL-1β в сыворотке крови до верхней границы нормы. Уровень спонтанной и стимулируемой продукции IL-1β и TNFα в культурах мононуклеаров периферической крови у больных основной группы, получавшей циклоферон, в ходе лечения также нормализовались. В группе сопоставления динамика изученных иммунологических показателей была менее выраженная и на момент завершения лечения они достоверно отличались от нормы.

3. Полученные данные свидетельствуют, что включение современного иммуноактивного средства циклоферона у больных ХТ патогенетически обоснованно и клинически перспективно.

Подтверждение e-mail

На test@yandex.ru отправлено письмо с ссылкой для подтверждения e-mail. Перейдите по ссылке из письма, чтобы завершить регистрацию на сайте.

Подтверждение e-mail