Офтальмогерпес (ОФТГ) является разновидностью инфекционного заболевания, вызываемого вирусом простого герпеса (ВПГ), характеризуется полиморфной клинической картиной, сопровождается развитием осложнений, приводящих к снижению зрительных функций, развитию катаракты и слепоты [1—3]. Лечение ОФТГ представляет большие трудности. Повысить эффективность терапии ОФТГ возможно применением средств, сочетающих в себе как этиотропные, противовирусные свойства, так и способность улучшать трофику и регенерацию тканей глаза. К таким средствам относятся препараты растительного происхождения. Настоящая статья посвящена результатам изучения эффективности глазных капель на основе экстракта побегов Solanum tuberosum (Панавир-ГЛК).

В работе использовали препараты Панавир-ГЛК и Панавир производства ООО «Национальная Исследовательская Компания» (Россия, Москва). Состав исследуемых препаратов представлен в табл. 1.

Препарат Панавир относится к лекарственным средствам растительного происхождения и обладает оригинальными фармакологическими свойствами, нетоксичен в терапевтических дозах (ЛД₅₀ ~3000 терапевтических доз), не имеет мутагенного, тератогенного, канцерогенного, аллергизирующего и эмбриотоксического действия и разрешен к клиническому применению в Российской Федерации с 2006 г. [4, 5]. Лекарственная форма Панавир-ГЛК рекомендована для широкого клинического изучения с 2013 г. (разрешение Минздрава России № 415 на проведение клинических исследований от 4 июля 2013 г.). Известно, что исследуемые лекарственные формы препарата обладают противовирусными, иммуномодулирующими и противовоспалительными свойствами, которые обусловлены входящими в его состав биологически активными компонентами, в том числе GG17 — гексозным гликозидом, содержащим глюкозу, рамнозу, арабинозу, маннозу, ксилозу, галактозу, уроновые кислоты [4—6]. Антивирусная активность препарата, в том числе в отношении ВПГ, связана с его способностью подавлять репликацию вируса в клетках, индуцировать и повышать образование интерферонов α и γ лейкоцитами крови в 2,7—3 раза. Препарат обладает цитопротекторным действием, защищая клетки от воздействия вирусов, ингибирует синтез вирусных белков, способствует торможению репликации вирусов в инфицированных культурах клеток, приводит к существенному снижению инфекционной активности вирусов, повышает жизнеспособность инфицированных клеток [5—7].

Для моделирования ОФТГ использовали ВПГ 1-го антигенного типа, штамм ЕС, полученный из НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского. Моделирование инфекции проводили по стандартной методике на самцах серых кроликов массой 2,5—3,0 кг, полученных из питомника ФГУП ОПХ «Манихино», которых содержали в стандартных условиях вивария [8, 9]. При выполнении исследований придерживались правил, принятых Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986). В эксперимент брали оба глаза кролика. Перед заражением глаза кроликов промывали физиологическим раствором и проводили их местную анестезию с использованием 1% раствора дикаина, который закапывали в конъюнктивальный мешок. Затем животных заражали вируссодержащей жидкостью (ВЖ) в дозе 10 ТЦИД₅₀ (тканевая цитопатическая инфекционная доза), которую наносили с помощью пипетки на предварительно скарифицированную роговицу. Все инфицированные ВПГ кролики через 2 сут после развития типичной картины эпителиального кератита (специфичность которого была подтверждена результатами выделения вируса из смывов с глаз) были рандомизированы на четыре группы по три особи в каждой. Инстилляции плацебо получала 1-я (контрольная) группа животных, Офтальмоферона — 2-я группа, Панавира — 3-я, Панавира-ГЛК — 4-я. Лечение с использованием Панавира (0,004% раствор внутривенно) и Панавира-ГЛК проводили через 48 ч после инфицирования в виде инстилляций по 2 капли 6 раз в сутки в течение 8 дней в сравнении с референс-препаратом Офтальмоферон (глазные капли, «ФИРН М», Россия) и плацебо (0,9% физиологический раствор NaCl). Доза вводимых в конъюнктивальный мешок препаратов соответствовала суточной дозе для взрослого человека.

Оценку состояния глаз у животных проводили ежедневно до начала введения лекарственных препаратов с помощью щелевой лампы после проведения флюоресцеиновой пробы (инстилляция 1 капли 0,5% раствора флюоресцеина в конъюнктивальный мешок) в течение 25 дней. Дефекты эпителиального покрова (эпителиопатия) и участки поврежденной стромы (язва роговицы) прокрашивали зеленым цветом. При поражении поверхностных слоев роговицы наблюдалась характерная картина (древовидная, звездчатая, точечная), при распространении воспалительного процесса вглубь роговицы развивалась картообразная (или некротическая) язва, захватывающая внутренние оболочки (кератоувеит), на дне передней камеры появлялся гипопион. Интенсивность прокрашивания роговицы обозначали по четырехбалльной шкале: 0 — отсутствие прокрашивания; 1 — едва заметное нестойкое прокрашивание; 2 — выраженное поверхностное прокрашивание инфильтрата; 3 — выраженное прокрашивание воспалительного инфильтрата во всю толщу. Также в баллах (4 — максимальный) оценивали интенсивность инфекционного процесса по выраженности каждого из параметров: конъюнктивита, блефарита (отек век и наличие гнойного отделяемого), склерита, кератита (табл. 2). Регистрируемые параметры были определены согласно требованиям нормативных документов [9]. Индекс выраженности симптоматики (ИВС) высчитывали для каждого глаза по каждому дню наблюдения путем суммирования баллов по каждому параметру.

Эффективность препаратов оценивали на пике выраженности патологического процесса в контрольной группе по стандартной методике [8, 9] и в соответствии с требованиями Национального руководства по проведению доклинических исследований лекарственных средств (цит. по [9]). Основными критериями эффективности препарата были: индекс лечебного действия (ИЛД), степень выраженности клинической симптоматики, продолжительность заболевания. ИЛД препарата вычисляли в процентах по формуле:

СИВС в группе контроля — CИВС в опытной группе

ИЛД =________________________________________ × 100%,

CИВС в группе контроля

где CИВС — средний ИВС, баллы.

Вирусологические исследования проводили по общепринятым стандартам и методикам [8, 9]. Выделение и титрование вируса из биоматериала животных (смывов с зараженных глаз), взятого в разные сроки после инфицирования, проводили in vitro на культуре клеток почек зеленых мартышек (Vero), полученной из НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского. Было проведено изучение общей и местной переносимости препаратов Панавир, Панавир-ГЛК, а также их влияния на нормальные физиологические функции глаза у животных. Для исследования влияния инстилляции исследуемых препаратов на физиологические функции глаза определяли внутриглазное давление (ВГД) тонометром Маклакова (ЗАО «ОРИОН МЕДИК», Санкт-Петербург, Россия) по стандартной методике, пуппилометрию проводили по обычной линейке с миллиметровыми делениями в вертикальном и горизонтальном меридианах, чувствительность роговицы проверяли в 5 основных точках. Полученные данные обрабатывали с помощью программы Statistica 6.0. Оценку достоверности различий между исследуемыми признаками проводили с использованием параметрических (t-критерий Стьюдента) и непараметрических методов статистики, в том числе с использованием U-критерия Манна—Уитни, который применяется при достаточно небольших объемах выборочных совокупностей. При проведении корреляционного анализа связи между параметрами внутри одной выборки использовали коэффициент ранговой корреляции Спирмена [10].

Результаты исследования течения ОФТГ у кроликов на фоне терапии препаратами Панавир, Панавир-ГЛК и в группах сравнения приведены в табл. 3. У инфицированных кроликов, получавших плацебо (группа контроля), отмечалось постепенное нарастание патологического процесса, достигавшее своего максимального развития к 5-м суткам после инфицирования. СИВС на 5-е сутки после заражения составил 14,0±1,2 баллов. Через 2 сут после инфицирования у животных группы контроля наиболее выраженными были такие проявления заболевания, как конъюнктивит, блефарит и эпителиальный кератит, в то время как признаки склерита были выражены меньше: васкуляризация охватывала не более 25—50% склер и сопровождалась появлением единичных везикулярных высыпаний на маргинальном участке склеры.

Эпителиальный кератит начинался с повреждения эпителия роговицы и протекал в двух формах: вначале в виде древовидного кератита, позже как географический кератит. По мере распространения воспаления с поверхности роговицы в ее глубокие слои у животных развивались стромальные кератиты, сопровождающиеся помутнением роговицы, нарушением ее прозрачности, зеркальности и блеска. На пике выраженности заболевания у кроликов отмечали стромальные кератиты в сочетании с резко выраженными признаками воспалительной реакции — конъюнктивитом, блефаритом и перикорнеальной инъекцией глаз. Полное помутнение роговицы регистрировали на 7—8-е сутки после инфицирования. Статистически значимых различий в клинической симптоматике между животными внутри группы отмечено не было. Необходимо отметить, что первичный ОФТГ у кроликов является самоограничивающимся процессом, поэтому к 21-м суткам наблюдения животные выздоравливали либо без каких-либо признаков перенесенного заболевания, либо с посткератитными явлениями разной степени выраженности.

Иная картина заболевания наблюдалась у инфицированных животных на фоне терапии с использованием препаратов Панавир-ГЛК, Панавир или Офтальмоферон. Наиболее выраженный, статистически достоверный эффект отмечен у препарата Панавир-ГЛК: уже через сутки после начала лечения отмечали снижение выраженности воспалительного процесса, приводящее к ускорению процесса эпителизации роговицы и снижению СИВС. На 5-е сутки после заражения СИВС препарата Панавир-ГЛК по непараметрическому U-критерию Манна—Уитни был достоверно ниже аналогичного показателя у животных, получавших плацебо, и составил 7,2±2,5 балла (р<0,05). К 12-м суткам после инфицирования наблюдалось затихание клинических проявлений, в то время как в контрольной группе животных симптомы ОФТГ регистрировали до 21,5±3,5 сут. Разница между показателями средней продолжительности заболевания (СПЗ) в группах статистически достоверна (р<0,05). Необходимо отметить, что в период с 3-х по 9-е сутки после инфицирования тяжесть ОФТГ у животных на фоне лечения препаратами Панавир-ГЛК или Офтальмоферон была достоверно менее выраженной по сравнению с таковой у животных, получавших плацебо. Статистически значимой разницы между показателями ИЛД препаратов Панавир-ГЛК и Офтальмоферон установлено не было.

Для выявления наличия связи между показателями СИВС и СПЗ у животных на фоне лечения препаратом Панавир-ГЛК мы провели корреляционный анализ показателей с использованием коэффициента ранговой корреляции Спирмена (r_s), который рекомендуется применять при небольшом числе наблюдений сравниваемых пар признаков внутри малой выборки [10]. Расчет коэффициента r_s показал наличие статистически значимой корреляции (р<0,05) между показателями СИВС и СПЗ у животных как на фоне лечения препаратом Панавир-ГЛК, так и на фоне лечения препаратами Панавир и Офтальмоферон. Коэффициент ранговой корреляции Спирмена (r_s) в исследуемых (2-й, 3-й и 4-й) группах составил — 0,943; 0,943 и 0,871 соответственно. В то же время корреляционный анализ, проведенный у животных, получавших плацебо, показал, что корреляция между показателем СИВС и СПЗ не достигает уровня статистической значимости: r_s равен 0,429, (p>0,05). Таким образом, Панавир-ГЛК при лечении ОФТГ у кроликов сопоставим по терапевтической эффективности с препаратом Офтальмоферон.

Исследование препарата Панавир (3-я группа) показало, что через 1 сут после начала применения препарата выраженность патологического процесса у животных достоверно не отличалась от выраженности такового у животных, получавших плацебо. Однако со 2-х суток применения препарата и в течение всего периода лечения СИВС у животных статистически значимо отличался от аналогичного параметра у инфицированных животных, получавших плацебо. Расчет коэффициента r_s Спирмена показал статистически значимую корреляцию (р<0,05) между показателями СИВС и СПЗ у животных на фоне лечения препаратом Панавир (r_s=0,943). ИЛД препарата Панавир составил 33,9±3,5%, что меньше ИЛД препарата Панавир-ГЛК на 14,6% и препарата Офтальмоферон на 10,4%. Разница между показателями ИЛД препаратов Панавир-ГЛК, Панавир и Офтальмоферон была статистически достоверной (p<0,05).

Следует отметить, что Панавир-ГЛК и Панавир проявляли активность наиболее быстро в случае лечения эпителиальных кератитов и умеренно — при лечении стромальных кератитов. Инстилляции препаратов Панавир-ГЛК и Панавир предотвращали развитие грубых помутнений роговицы, в то время как в контрольной группе животных, получавших плацебо, и у животных, леченных препаратом Офтальмоферон (2-я группа), образование грубых помутнений типа «макула» было отмечено в 16,7% случаев. У животных на фоне применения препаратов Панавир-ГЛК или Панавир образование выраженных помутнений роговицы, свидетельствующих о тяжести воспалительного процесса, наблюдали в 2 раза реже по сравнению с аналогичным показателем в контрольной группе (16,7% случаев против 33,3% случаев соответственно). Легкая степень помутнения роговицы была выявлена в 50% случаев на фоне лечения препаратом Панавир и в 33,3% случаев на фоне лечения препаратом Панавир-ГЛК или референс-препаратом. В контрольной группе животных образование помутнений легкой степени выраженности наблюдали только в 16,7% случаев. Таким образом, применение исследуемых препаратов, так же как и препарата Офтальмоферон, предотвращало развитие выраженных и грубых посткератитных проявлений в 83,3% случаев.

Было проведено изучение влияния различных модификаций препарата Панавир, препарата Офтальмоферон на уровень репродукции ВПГ, которое показало наличие у исследуемых препаратов специфического противовирусного действия (табл. 4).

Следует отметить, что на фоне применения препаратов Панавир-ГЛК, Панавир изменений физиологических функции глаз у животных (размер зрачка, ВГД, чувствительность роговой оболочки), а также изменений в массе тела, состоянии их шерстного покрова и слизистых оболочек, в поведенческих реакциях установлено не было. Полученные результаты свидетельствуют о хорошей как местной, так и общей переносимости препаратов Панавир-ГЛК и Панавир у кроликов.

Выявленные позитивные эффекты терапии Панавиром-ГЛК и Панавиром экспериментального ОФТГ у кроликов связаны с тем, что данные препараты обладают комплексом фармакологических свойств, основные из которых (противовирусные, противовоспалительные и иммуномодулирующие) обусловлены входящими в их состав биологически активными компонентами [5]. Среди них можно упомянуть GG17 — гексозный гликозид, состоящий из глюкозы, рамнозы, арабинозы, маннозы, ксилозы и др. Как было показано ранее, антивирусная активность препаратов связана с их способностью подавлять репликацию ВПГ в клетках, ингибировать синтез вирусных белков, а также повышать жизнеспособность инфицированных клеток [5—7]. Кроме того, в последнее время было установлено, что эти препараты обладают способностью индуцировать и повышать образование интерферонов α и γ в крови в 2,7—3,0 раза, стабилизировать сниженные показатели клеточного иммунитета [5, 6].

В нашем исследовании показано, что местное применение препарата Панавир-ГЛК у кроликов по схеме 6 инстилляций в день, ежедневно в течение 8 дней приводило к выраженному терапевтическому эффекту, более быстрому купированию острого воспаления, уменьшению сроков заболевания, предотвращало развитие грубых помутнений роговицы, снижало инфекционную активность вируса в 20—30 раз. При этом практически отсутствовали побочные эффекты. Наиболее быстрый и выраженный результат от применения Панавира-ГЛК наблюдался при лечении эпителиальных кератитов, а также при непродолжительной персистенции вируса. По эффективности глазные капли были сопоставимы с комбинированным референс-препаратом Офтальмоферон (при использовании по аналогичной схеме), многофакторное действие которого обусловлено фармакологическими свойствами компонентов, входящих в его состав (интерферон-α-2b человеческий рекомбинантный, борная кислота, дифенгидрамин гидрохлорида (димедрол) и др.).

Следует отметить, что полученные нами данные о противовирусной активности препарата согласуются с данными других авторов, показавших перспективность изучения противовирусных свойств препарата Панавир в отношении герпетической инфекции и его применения в офтальмологической практике при лечении больных с рецидивирующими формами ОФТГ [4, 6, 7].

Полученные нами результаты использования препарата Панавир-ГЛК демонстрируют один из подходов к повышению эффективности лечения больных с ОФТГ, особенно тех, у кого общепринятая терапия с использованием препарата-выбора Ацикловир и его аналогов является неэффективной, с учетом того, что по механизму действия исследуемый препарат отличается от Ацикловира [1, 3]. Можно предположить, что применение Панавира-ГЛК в комплексе терапевтических мероприятий у больных ОФТГ в сочетании с Ацикловиром позволит не только усилить действие последнего, но и минимизировать возможные риски развития резистентности ВПГ к его действию. Кроме того, топическое действие Панавира-ГЛК позволит скорректировать локальный иммунный ответ и значительно улучшить качество лечебного процесса. Таким образом, приведенные данные указывают на то, что глазные капли Панавир могут быть включены в комплекс лечебных схем ОФТГ.

Конфликт интересов отсутствует.