Рак предстательной железы является одним из наиболее часто выявляемых злокачественных новообразований у мужчин. Стандартом диагностики считаются ректальное пальцевое исследование, определение уровня простатического специфического антигена (ПСА) в сыворотке крови и толстоигольная биопсия. Согласно опубликованным данным, частота негативного результата при гистологическом исследовании биопсии составляет 70-80% [1]. Учитывая тот факт, что фокусы рака могут не попасть в полученный при биопсии материал, при повышенном уровне ПСА повторная биопсия нередко остается вариантом выбора. Частота гипердиагностики простатической интраэпителиальной неоплазии высокой степени (вПИН), требующей обязательного проведения повторной биопсии, достигает 24% [2]. Повторная биопсия, безусловно, увеличивает диагностическую точность и снижает количество ложноположительных и ложноотрицательных результатов, но является финансово затратной, а также неприятной, а иногда и весьма болезненной для пациента процедурой. Все вышеперечисленные факты, а также несовершенство используемой в настоящий момент панели антител для дифференциальной диагностики аденокарциномы, вПИН и состояний, их имитирующих, диктуют необходимость поиска новых маркеров, ассоциированных с высоким риском наличия рака предстательной железы для прицельного отбора пациентов, действительно нуждающихся в повторной биопсии и более тщательном наблюдении. На основе опубликованных данных полногеномного профилирования транскриптома нормальной ткани предстательной железы, ПИН и рака [3] нами отобран ряд белков, различие в экспрессии которых потенциально может быть использовано для дифференциальной диагностики новообразований предстательной железы и состояний, их имитирующих. В частности, для анализа выбраны PTOV1 (Prostate Tumor Overexpressed Gene 1), APOD (Apolipoprotein D) и EPHA4 (Ephrin receptor A4).

Аполипопротеин D (APOD) - гликопротеин, ассоциированный с липопротеинами высокой плотности. Учитывая первичную структуру, APOD был отнесен к семейству липокалинов - белков, участвующих в транспорте гидрофобных лигандов, таких как витамин А, простагландины и др. В частности, APOD может связывать холестерол, прогестерон, билирубин, арахидоновую кислоту. В норме высокий уровень экспрессии данного белка наблюдается в опухолях надпочечников, поджелудочной железы, яичников, яичек, нервной системы [4]. Кроме того, экспрессия APOD обнаруживается в опухолях из желез с апокриновым типом секреции [5]. На многих клеточных культурах показано, что экспрессия APOD подавляется эстрогенами и стимулируется андрогенами и обратно коррелирует с пролиферацией клеток [6-8]. Согласно гипотезе P. Provost и соавт., свою основную функцию APOD осуществляет локально, а не системно [9].

Ген PTOV1 был клонирован в 2001 г. P. Benedit и соавт., и этой же группой исследователей описана его гиперэкспрессия в 9 из 11 образцов рака предстательной железы (методами RT-PCR и иммуногистохимии) [10]. В 2003 г. группа ученых из того же учреждения во главе с A. Santamaria описала гиперэкспрессию белка, кодируемого данным геном, при иммуногистохимическом анализе в 71% из 38 аденокарцином предстательной железы и в 80% из 10 интраэпителиальных неоплазий высокой степени [11]. В обеих статьях отмечалась цитоплазматическая экспрессия PTOV1 с частичной транслокацией экспрессии в ядро в начале S-фазы. Повышение экспрессии данного гена при переходе от ПИН к раку отмечено также в публикации S. Ashida и соавт. [3].

EPHA4 - член семейства рецепторных тирозинкиназ, играющий ключевую роль в развитии нервной системы и ангиогенезе, участвуя в регуляции подвижности и формы клеток [12]. Повышение экспрессии гена, кодирующего данный белок, при переходе от ПИН к раку было также описано в статье S. Ashida и соавт. [3]. Кроме того, с помощью малых интерферирующих РНК этой группой авторов показано, что гиперэкспрессия EPHA4 при переходе вПИН в рак оказывает существенное влияние на рост аденокарциномы, а подавление его экспрессии снижает жизнеспособность клеток.

Цель работы - оценка диагностической и прогностической значимости экспрессии PTOV1, APOD и EPHA4 в неоплазиях предстательной железы.

Для анализа отобраны 90 пациентов с раком предстательной железы, перенесших радикальную простатэктомию. Средний возраст пациентов составил 62 года (от 41 года до 76 лет). Наличие в образцах аденокарциномы и вПИН подтверждалось иммуногистохимическими реакциями с антителами к АMACR (P504S) и цитокератину высокой молекулярной массы (HMW) 34βE12. Анализ экспрессии PTOV1, APOD и EPHA4 проводили иммуногистохимическим методом на срезах, изготовленных с тех же блоков. В качестве первичных антител использовали поликлональные кроличьи антитела белку PTOV1 (Abcam, ab81173), к белку EPHA4 (Abcam, ab5396) и моноклональные кроличьи антитела к APOD (Abcam, ab108191), в качестве системы визуализации использовали систему EnVisionFlex («Dako»). Интенсивность реакции оценивали как отсутствие экспрессии, экспрессию слабой интенсивности, умеренной интенсивности и выраженной.

Морфологическими факторами прогноза заболевания выбраны размер и распространенность опухоли (pT), наличие метастазов в регионарных лимфатических узлах и степень дифференцировки по шкале Глисона.

Оценку статистической значимости результатов исследования выполняли методом точного теста Фишера. Уровень значимости (р) приняли равным 0,05.

Паракринное действие APOD заключается в распределении его лигандов между клетками, поэтому для данного белка характерна цитоплазматическая экспрессия. В настоящем исследовании в большинстве случаев вПИН метка располагалась в цитоплазме апикальной части клеток. В раке экспрессия выявлялась также в апикальной части клеток и/или в секрете желез в просвете (рис. 1, 2). Экспрессия APOD (независимо от интенсивности) отмечена в 76% (68 пациентов) случаев и в раке, и в вПИН, в 4% (4 пациента) только в раке и в 7% (6 пациентов) только в вПИН. В морфологически нормальной ткани предстательной железы лишь в 2 случаях наблюдалась умеренная экспрессия, при этом в данных структурах отсутствовала экспрессия P504, а при реакции с 34βE12 наблюдалась прерывистость слоя базальных клеток (данные структуры расценены при рутинном гистологическом исследовании как P504-негативные очаги вПИН).

При оценке зависимости экспрессии APOD и морфологических факторов прогноза отмечено равномерное распределение опухолей APOD+ и APOD– по стадии процесса и распространенности первичной опухоли (рТ). В нашей выборке различия между группами по наличию метастазов в регионарных лимфатических узлах и объему поражения оказались статистически незначимыми (p=0,46 и p=0,6 соответственно), прогностическое значение экспрессии APOD выявить не удалось. Оценка взаимосвязи экспрессии APOD и степени дифференцировки опухоли оказалась невозможной в связи с небольшим числом наблюдений низкодифференцированной аденокарциномы.

Также в нашей работе во всех исследованных образцах в раке и вПИН отмечено значительное снижение цитоплазматической экспрессии PTOV1 (отсутствие экспрессии или слабая интенсивность) по сравнению с морфологически нормальными железами (умеренная интенсивность или выраженная экспрессия) (см. рис. 1, 2, 3). В четырех образцах отмечалось отсутствие экспрессии PTOV1 и в ряде морфологически нормальных желез, однако размер выборки не позволяет сделать категорических заключений.

Относительно экспрессии EPHA4 в морфологически нормальных железах, вПИН и раке в нашем исследовании разницы отмечено не было. Во всех случаях как в доброкачественных структурах, так и в злокачественных поражениях наблюдалась положительная мембранно-цитоплазматическая реакция от слабой до умеренной интенсивности. Статистически значимых различий получено не было.

В результате проведенного исследования было отмечено, что высокая частота экспрессии APOD в вПИН и раке, а также отсутствие экспрессии в подавляющем большинстве морфологически нормальных желез позволяет использовать данный белок в качестве дополнительного маркера в дифференциальной диагностике новообразований предстательной железы. Кроме того, учитывая наличие публикаций, указывающих на связь APOD с гормональной чувствительностью, в частности чувствительностью к андрогенам [13], целесообразно проведение дальнейших исследований взаимосвязи его экспрессии с кастрационной резистентностью опухолей предстательной железы. Наметившиеся тенденции в разнице в экспрессии PTOV1 в морфологически нормальной ткани предстательной железы, вПИН и раке требуют дальнейшего исследования на большей выборке.

Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ в рамках научного проекта № 15−04−03629 а.

Участие авторов:

Концепция и дизайн исследования: Д.О.А., Ю.Ю.А., Л.Э.З., Г. А.Ф.

Сбор и обработка материала: Д.О.А., Ю.Ю.А., Л.Э.З., Л.В.М.

Статистическая обработка: Д.О.А.

Написание текста: Д.О.А.

Редактирование: Л.В.М., Ю.Ю.А., Л.Э.З., Г. А.Ф.

Конфликт интересов отсутствует.