Нейросифилис (НС) — тяжелое, трудно поддающееся лечению заболевание, вызванное Treponema pallidum, результатом которого являются значительное снижение качества жизни больных, их инвалидизация и даже летальный исход, особенно в случаях неполноценного обследования и проведения неадекватной терапии.

Несмотря на снижение в РФ общей заболеваемости сифилисом с 2000 по 2015 г. в 7 раз (со 165 случаев заболевания с впервые установленным диагнозом на 100 тыс. населения в 2000 г., до 23,5 в 2015 г.) [1, 2], отмечается увеличение показателей заболеваемости населения Н.С. Так, в Москве за период с 2009 по 2014 г. число зарегистрированных случаев НС возросло в 10,9 раза. В 2015 г. уровень заболеваемости НС несколько снизился (с 239 случаев в 2014 г. до 188 случаев в 2015 г.), хотя продолжает занимать значительную долю (7%) в структуре всех форм сифилиса (неопубликованные статистические данные Московского научно-практического Центра дерматовенерологии и косметологии за 2009—2015 гг.). Следует отметить, что как ранние, так и поздние формы НС клинически нередко характеризуются отсутствием или слабой выраженностью симптоматики, что существенно затрудняет диагностику.

В настоящее время определяющим для диагностики НС является исследование спинномозговой жидкости (СМЖ) больных. Однако применяемые при этом методологии определения содержания белка и клеточного состава СМЖ с подсчетом количества клеток (цитоза) неспецифичны для сифилиса. Для оценки специфичности поражения применяют комплекс нетрепонемных и трепонемных тестов, направленных на выявление противотрепонемных антител. Однако использование регламентированных методов исследования также далеко не всегда позволяет сделать однозначный вывод о наличии либо отсутствии заболевания. Показания к применению в медицинских учреждениях РФ различных методов определения в образцах биологического материала антител к T. pallidum регламентированы методическими указаниями, утвержденными Приказом Минздрава Р.Ф. № 87 от 26.03.01 «О совершенствовании серологической диагностики сифилиса».

Одним из методов эффективной диагностики НС за рубежом признается метод VDRL, получивший название от впервые предложившей его лаборатории (Veneral Disease Research Laboratory) [3, 4]. Это простой и быстро выполняемый нетрепонемный тест, основанный на образовании комплекса кардиолипинового антигена с антителами к кардиолипину в крови и СМЖ больного сифилисом и визуализации образовавшихся комплексов под световым микроскопом. Несмотря на несомненную диагностическую эффективность данного метода при НС, описанную зарубежными и единичными отечественными исследователями [5, 6], он пока не нашел широкого применения в повседневной клинической практике и не регламентирован приказами и стандартами в РФ, что обусловливает необходимость сравнения его эффективности с другими (регламентированными) методами диагностики НС.

В последнее время появился новый класс наборов реагентов для лабораторной диагностики инфекционных заболеваний — иммуночипы, принцип работы которых основан на непрямом методе выявления антител к спектру антигенов с помощью флюоресцентной детекции [7, 8]. Эффективность использования нового формата набора реагентов была продемонстрирована на стандартных коммерческих панелях проб, содержащих и несодержащих антитела к антигенам T. pallidum, а также при исследовании образцов сыворотки крови, положительных и отрицательных по содержанию антител к белковым антигенам T. pallidum в иммуноферментном и иммунохемилюминесцентном анализе [9].

Оценка эффективности ликвородиагностики НС с помощью иммуночипов до настоящего времени не проводилась.

Объектом исследованиястали образцы сыворотки крови и спинномозговой жидкости, полученные от 49 пациентов (32 мужчины и 17 женщин) с установленным диагнозом Н.С. Возраст пациентов, вошедших в данную группу, варьировал от 20 до 62 лет. Диагноз устанавливался на основании анамнестических и клинических данных, результатов лабораторного исследования образцов сыворотки крови и СМЖ. Регистрация вновь выявленных случаев НС проводилась в соответствии с Международной классификацией болезней и проблем, связанных со здоровьем, 10-го пересмотра (МКБ-X) и с клинической классификацией, применяемой в российской дерматовенерологии, основанной на учете длительности заболевания и локализации поражения нервной системы [10].

В соответствии с МКБ-X, среди всех 49 пациентов с установленным НС были выделены следующие группы: пациенты с поздним поражением нервной системы — 17 (34,7%) человек (код А52.1, НС с симптомами — НСС); пациенты с асимптомным НС (АНС) — 24 (49%) человека (код А52.2), пациенты с НС неуточненным (НСн/у) — 8 (16,3%) человек (код А52.3). Состав больных НС в зависимости от первоначального диагноза представлен на рис. 1.

Методы выявления антител в нетрепонемных и трепонемных тестах. В рамках лабораторного обследования пациентов с верифицированным НС в образцах СМЖ проводилось определение цитоза и концентрации общего белка. Кроме этого, в парных образцах сыворотки крови и СМЖ, полученных от пациентов, определялось наличие антител к T. pallidum с помощью регламентированных иммунохимических методов исследования, таких как реакции микропреципитации (РМП) и пассивной гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА), реакции иммунофлюоресценции в модификации (РИФабс и РИФц), реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ), а также нерегламентированного приказами и стандартами РФ нетрепонемного метода диагностики — VDRL (Veneral Disease Research Laboratory).

Иммунохимические методы и использованные при их постановке наборы реагентов представлены в табл. 1.

Все образцы сыворотки крови и СМЖ, полученные от пациентов контрольной группы (24 пациента, не имевшие в анамнезе и при клиническом обследовании проявлений заболевания, вызванного T. pallidum), были исследованы на наличие антител к кардиолипиновому антигену (в РМП, VDRL) и антител к T. pallidum (в ИФА и иммуночипах).

Технология иммуночипов для диагностики НС. Кроме вышеописанных иммунохимических методов, в исследовании была применена современная инновационная технология иммуночипов, позволяющая повысить эффективность (чувствительность и специфичность) иммунохимической лабораторной диагностики сифилиса, благодаря возможности выявления широкого спектра антител в образцах сыворотки, плазмы крови или СМЖ человека с помощью совместного использования рекомбинантных аналогов белков T. pallidum Tp47, Tp17, Tp15, TmpA, что доказано на примере ИФА и иммуноблоттинга [11].

Для получения рекомбинантных аналогов белков T. pallidum с помощью стандартных генно-инженерных методов были сконструированы плазмиды, несущие гены, кодирующие антигенные детерминанты данных белков. В качестве регуляторных последовательностей использовались промотор и терминатор РНК полимеразы бактериофага T7. N-концевая часть рекомбинантных белков содержала фрагмент из шести аминокислотных остатков гистидина.

Рекомбинантные антигены экспрессировали в клетках Escherichia coli BL21 (DE3) («New England Biolabs», США). Культивирование проводили при 37 °С в питательной среде LB до достижения значения OD₆₀₀, равного 1,0. Экспрессию белков индуцировали добавлением ИПТГ (изопропил-β-D-1-тиогалакто-пиранозид) до конечной концентрации 1 мМ, с последующим ростом еще в течение 3 ч. Клетки разрушали на ультразвуковом дезинтеграторе Sonifier 450 («Branson Sonifier», США). Очистку рекомбинантных белков проводили методами металл-хелатной хроматографии на Ni-активированной Chelating Sepharose («GE Healthcare», США) и ионообменной хроматографии на колонке MonoQ («GE Healthcare», США). Чистоту выделенных препаратов белков определяли методом гель-электрофореза по Лэммли.

Растворы рекомбинантных белков-антигенов T. pallidum были разбавлены фосфатно-солевым буферным раствором (PBS) до конечной концентрации Tp 47 50 мкг/мл, Tp17 5 мкг/мл, Tp15 25 мкг/мл, TmpA 25 мкг/мл. Методом бесконтакной пьезопечати с помощью прибора sciFLEXARRAYER S3 («Scienion», Германия) растворы белков-антигенов T. pallidum, растворы положительных контролей (IgG человека в концентрации 100, 50, 25, 10 и 5 мкг/мл, IgM человека в концентрации 100, 50, 25, 10 и 5 мкг/мл, производитель ИМТЕК, Россия) и PBS в качестве отрицательного контроля были нанесены в трех повторах на поверхность альдегидактивированных стеклянных слайдов VALS25 (CEL, США). Каждому белку-антигену и контролю соответствовали индивидуальные споты (spot — пятно). На одном слайде было сформировано 12 эрреев (ограниченные зоны, предназначенные для исследования одного клинического/контрольного образца). В качестве маркера границы эррея был использован бычий сывороточный альбумин («Sigma-Aldrich Inc.», США), меченный Cy3 или Cy5 NHS-эфиром («GE Healthcare», «Sigma-Aldrich Inc.», США), нанесенный в 10 повторах по вертикали и в 6 повторах по горизонтали (рис. 2, 3).

Для блокирования лишних активных групп на поверхности стеклянных слайдов, а также неспецифического связывания, после нанесения растворов белков-антигенов и контрольных растворов и инкубации в течение ночи во влажной камере при комнатной температуре, стеклянные слайды инкубировали в 0,55% растворе казеина (SDT, Германия) в течение 1 ч при температуре 37 °C.

Выявление антител к антигенам T. pallidumв образцах сыворотки крови и СМЖ проводилось следующим образом. На I этапе исследования в эрреях в течение 30 мин при температуре 37 °C инкубировали клинические/контрольные образцы, разведенные в соотношении 1:9 в PBS, содержащем 0,05% раствор Triton X-100, 0,05% Tween-20, 0,01% NaN₃, 0,55% раствор казеина (SDT, Германия), 5% BSA («Sigma-Aldrich Inc.», США). При этом происходило связывание содержащихся в образцах специфических антител с иммобилизованными на иммуносорбенте антигенами T. pallidum. На II этапе для выявления образовавшихся иммунных комплексов антиген-антитело проводили инкубацию с предварительно разведенным в том же буферном растворе конъюгатом, представляющим собой смесь антител к IgG и IgM человека, меченных флюорофорами Cy5 и Cy3 соответственно («Jackson Immunoresearch», США).

Оценка результатов тестирования проводилась с помощью флюоресцентного сканера MArS («Ditabis», Германия) по двум каналам: Cy5/Red (оценка сигналов специфических антител класса G) и Cy3/Green (оценка сигналов специфических антител класса M).

Первичная обработка флюоресцентных профилей иммуночипов проводилась с использованием программного обеспечения SpotScout («Ditabis», Германия). На основе полученных цифровых данных для каждого образца сыворотки крови или СМЖ определялось наличие специфических IgG и IgM к иммобилизованным рекомбинантным антигенам T. pallidum. Для этого сначала в каждом эррее рассчитывалась медиана из трех значений медианы флюоресценции спотов, соответствующих контрольным точкам. Далее рассчитывалась медиана значений флюоресценции значимых спотов. По медианным значениям контрольных спотов определялись коэффициенты уравнения зависимости сигнала флюоресценции от концентрации контрольного образца. Для упрощения расчетов учитывалось, что эта зависимость прямолинейна и описывается уравнением F_l = b+aC, где F_l — значение сигнала флюоресценции, С — концентрация контрольного образца, a и b —коэффициенты уравнения. С использованием полученной зависимости по медианным значениям флюоресценции значимых спотов рассчитывалось содержание антител к белкам-антигенам T. pallidum в каждом образце сыворотки крови или СМЖ, выраженное в условных единицах (у.е.).

Согласно данным тестирования образцов, полученных от пациентов контрольной группы, были выбраны следующие правила интерпретации результатов: считалось, что в данном образце сыворотки крови или СМЖ выявлены специфические антитела к определенному антигену T. pallidum, если итоговые значения флюоресценции в спотах, соответствующих данному антигену, превышали или были равны пороговому значению в 5 у.е. Образец считали положительным, если в нем были выявлены антитела к одному и более антигенам T. pallidum. Образец считали отрицательным, если итоговые значения флюоресценции значимых спотов для всех иммобилизованных антигенов были меньше порогового значения.

Оценку эффективности выявления в образцах сыворотки крови и СМЖ антител к кардиолипиновому антигену и специфическим антигенам T. pallidumс помощью перечисленных выше методов проводили путем расчета показателей диагностической чувствительности (ДЧ) и специфичности, для ряда методов — диагностической эффективности [12].

Статистический анализ результатов исследования проводился путем определения средней величины, ошибки средней величины и среднего квадратического отклонения по Е.В. Монцевичюте-Эрингене [13]. Различия считали статистически значимыми при значении уровня достоверности p<0,05.

Результаты общеклинических исследований образцов спинномозговой жидкости пациентов с установленным НС. Исследование образцов СМЖ, полученных от пациентов с верифицированным НС, с использованием общеклинических методов выявило увеличенное количество лимфоцитов в 13 (27%) образцах СМЖ, в том числе в 4 (16,7%), полученных от пациентов с АНС, в 7 (41,2%) образцах, полученных от пациентов с НСС, в 2 (25%) образцах, полученных от пациентов с НСн/у. Повышенный уровень белка в СМЖ был выявлен в образцах, полученных от 15 (30,6%) пациентов, в том числе 6 (25%) образцов были получены от пациентов с АНС, 9 (53%) образцов — от пациентов с НСС, 1 (12,5%) — от пациента с НСн/у. Данные сравнения средних показателей цитоза и общего содержания белка в образцах СМЖ, полученных от пациентов, включенных в группы с АНС, НСС, НСн/у, приведены на рис. 4.

Сравнительный анализ среднего показателя содержания клеток в образцах СМЖ (цитоза) показал наличие достоверных различий (p≤0,05) между группами образцов, полученных от пациентов с АНС и НСС (3,56±0,63 клеток/мкл и 6,56±1,37 клеток/мкл соответственно), при этом уровень цитоза у больных НСС был достоверно выше. Средний показатель содержания клеток в образцах СМЖ в группе образцов, полученных от пациентов с НСн/у, составил 4,61±1,07 клеток/мкл, и не показал достоверных различий с другими группами образцов.

Сравнительный анализ среднего показателя содержания общего белка в образцах СМЖ показал наличие достоверных различий (p≤0,05) между группами образцов, полученных от пациентов с АНС и НСС (0,36±0,02 и 0,49±0,05 г/л соответственно), и между группами образцов, полученных от пациентов с НСн/у и НСС (0,31±0,04 и 0,49±0,05 г/л соответственно). Оба показателя были достоверно выше в образцах, полученных от группы пациентов с НСС.

Результаты выявления антител, определяемых в нетрепонемных и трепонемных тестах, в образцах сыворотки крови больных НС. При исследовании образцов сыворотки крови пациентов с установленным НС положительные результаты РМП (4+ и 3+) были получены в 48 (97,9%) образцах, и только 1 образец, полученный от пациента с асимптомным НС, был отрицателен. Положительный результат (4+) VDRL-теста был получен при исследовании 39 образцов сыворотки крови, положительный результат (2+) — 9 образцов, и только 1 образец, полученный от пациента с асимптомным НС, был слабоположителен (1+) в VDRL-тесте (табл. 2).

По результатам исследования было установлено, что методом РМП антитела к кардиолипиновому антигену определялись в крови 23 из 24 пациентов (95,8%) с АНС, у всех (100%) пациентов с НСС (n=17) и НСн/у (n=8). Отрицательный результат исследования был получен у 1 пациента. При исследовании сывороток крови методом VDRL антитела к кардиолипиновому антигену были выявлены у всех (100%) пациентов с НС.

Все образцы сыворотки крови были изучены в РМП и VDRL с титрованием. Значения титров более 1:4 были получены при исследовании 10 (42%), 3 (17,6%) и 4 (50%) образцов сыворотки крови, полученных от пациентов с АНС, с НСС и с НСн/у соответственно. Значения титра РМП 1:64 и 1:128, свидетельствующие о высоком содержании антител к кардиолипину, были установлены в 3 (17,6%) и 1 (12,5%) образцах пациентов с НСС и НСн/у соответственно.

Результаты исследования образцов сыворотки крови, полученные от пациентов с верифицированным НС, с использованием трепонемных тестов (РПГА, ИФА, РИФабс, РИФ200, РИБТ), не приводятся, так как во всех 49 образцах были выявлены антитела к T. pallidum. Титр РПГА составил 1:2560 при исследовании всех образцов сыворотки крови. Коэффициент позитивности в ИФА варьировал от 5,7 до 15.

При изучении образцов сыворотки крови, полученных от больных НС, с использованием иммуночипа, во всех 49 образцах в тех или иных сочетаниях были выявлены специфические антитела к четырем рекомбинантным белкам-антигенам (Тр17, Тр15, Тр47 и TmpA) T. pallidum (100%).

При исследовании 24 образцов сыворотки крови, полученных от пациентов контрольной группы, были выявлены отрицательные результаты в РМП, VDRL, ИФА и при использовании технологии иммуночипа. В других методах исследования данные образцы не тестировались.

Основываясь на полученных данных, были определены диагностические характеристики нетрепонемных и трепонемных методов выявления антител в образцах сыворотки крови больных НС (табл. 3).

Как следует из представленных данных табл. 3, при исследовании образцов сыворотки крови, полученных от больных НС, метод VDRL оказался более чувствительным из нетрепонемных по сравнению с РМП. Его диагностическая чувствительность оказалась равной 100%, в то время как для РМП — 97,9%. Диагностическая специфичность РМП составила 100%, диагностическая эффективность — 98,6%. Для VDRL данные показатели составили 100%.

Диагностическая чувствительность всех использованных трепонемоспецифических методов, включая технологию иммуночипов, составила 100%, что может быть связано с высоким содержанием антител в сыворотке крови больных сифилисом на этапе развития инфекционного процесса, вызванного T. pallidum, включающем поражение нервной системы, и высокой чувствительностью использованных диагностикумов.

Диагностическая специфичность и диагностическая эффективность ИФА и иммуночипа составила 100%. Для других трепонемных тестов показатели диагностической специфичности и диагностической эффективности не определялись.

Результаты выявления антител, определяемых в нетрепонемных и трепонемных тестах в образцах спинномозговой жидкости. При исследовании образцов СМЖ, полученных от пациентов с НС, было установлено, что положительные результаты РМП (4+ и 3+) наблюдались только в 6 (12,2%) из 49 образцов, из которых 1 образец был от пациента с АНС (1/24; 4,1%), 2 — от пациентов с НСС (2/17; 11,8%) и 3 (3/8; 37,5%) — от пациентов с НСн/у. Положительный результат VDRL на уровне 4+ был получен при исследовании 16 образцов СМЖ, положительный результат на уровне 2+ — трех образцов. При этом у больных АСС чувствительность VDRL составила 16,7% (4/24), у больных НСС — 70,6% (12/17), у больных НС н/у — 37,5% (3/8). Всего при тестировании образцов СМЖ у больных НС было выявлено 19 (19/49; 38,8%) положительных результатов (табл. 4).

Результаты исследования образцов СМЖ, полученных от пациентов с НС, с использованием классических трепонемных тестов, приведены в табл. 5.

Из приведенных в табл. 5 данных следует, что при постановке РПГА положительный результат был получен у 21 (87,5%) из 24 больных АНС, у 16 (94,1%) из 17 больных НСС и у 7 (87,5%) из 8 больных НСн/у. Общее число положительных результатов РПГА у больных НС составило 44 (89,8%). Отрицательный результат РПГА получен при исследовании 3 (12,5%) образцов пациентов с АНС, 1 (5,9%) образца больного НСС и 1 (12,5%) образца больного НСн/у.

Исследование образцов СМЖ, полученных от пациентов с верифицированным НС, методом ИФА: положительный результат получен у всех 24 (100%) больных АНС, у 16 (94,1%) из 17 больных НСС и у всех 8 (100%) больных НСн/у. В ИФА был получен 1 (5,9%) отрицательный результат в образце пациента с НСС.

При исследовании всех 24 образцов СМЖ, полученных от пациентов контрольной группы, в ИФА были получены отрицательные результаты. Таким образом, диагностическая специфичность ИФА составила 100%, а диагностическая эффективность — 98,6%.

При проведении РИФц положительные результаты были получены во всех группах больных НС (100%), в том числе: слабоположительный результат (2+) был получен при исследовании 2 (8,3%) образцов больных с АНС, 1 (5,9%) образца пациента с НСС.

При постановке РИБТ положительные и слабоположительные результаты были получены у 18 (75%) из 24 больных АНС, у 15 (88,2%) из 17 больных НСС и у 7 (87,5%) из 8 лиц с НСн/у. Суммарно положительные (в том числе слабоположительные) результаты РИБТ определялись у 40 (81,6%) из 49 больных Н.С. Отрицательная РИБТ отмечена при исследовании 6 (25%) образцов от пациентов с АНС, 2 (11,8%) образцов пациентов с НСС и 1 (12,5%) образца от пациента с НСн/у.

Результаты выявления антител к рекомбинантным антигенам T. pallidum в образцах СМЖ больных НС в формате иммуночипа. При изучении образцов СМЖ, полученных от пациентов с НС, с использованием разработанного нами иммуночипа, специфические антитела как минимум к одному из рекомбинантных антигенов (Тр17, Тр15, Тр47и TmpA) T. pallidum были выявлены во всех 49 (100%) образцах при всех клинических формах Н.С. При этом следует отметить, что антитела к Tp17 регистрировались у всех пациентов (100%), антитела к остальным рекомбинантным антигенам — с близкой частотой на уровне 70%: к Tp47 — в 79,6% (n=39), к Тр15 — в 75,5% (n=37), к TmpA — в 71,4% (n=35).

При исследовании всех 24 образцов СМЖ, полученных от пациентов контрольной группы, с использованием технологии иммуночипа были получены отрицательные результаты. Таким образом, диагностическая специфичность и диагностическая эффективность иммуночипа составили 100%.

Следует отметить значительное разнообразие спектров антител к T. рallidum у больных с различными клиническими формами НС при изучении СМЖ с использованием технологии иммуночипа (табл. 6).

Как следует из приведенных данных табл. 6, всего в образцах СМЖ пациентов с НС встречалось семь различных комбинаций (спектров) антител к рекомбинантным антигенам T. рallidum. При этом у большинства пациентов (n=29; 59%) встречалась первая комбинация — антитела ко всем четырем антигенам T. рallidum (Tp17, 15, 47, TmpA). Антитела к трем антигенам T. рallidum в различных сочетаниях (вторая комбинация — Tp17, 47, TmpA; третья комбинация — Tp17,15, TmpA; четвертая комбинация — Tp17, 15, 47) наблюдалась у 11 (22%) обследованных. Антитела к двум антигенам T. рallidum (пятая комбинация — Tp17, 15 и 6 — Tp17, 47) зарегистрированы у 2 (4%) обследованных и к одному антигену (Tp17) — у 7 (15%) обследованных. Таким образом, у большинства пациентов (n=40; 81,6%)одновременно регистрировались антитела к трем или четырем антигенам T. рallidum, а у 42 (85,7%) пациентов — к двум и более антигенам T. рallidum.

Наибольшее разнообразие спектров антител к белкам-антигенам T. рallidum выявлено в группе образцов, полученных от пациентов с АНС (с первой по пятую и седьмая комбинации антител) и несколько меньшее (по четыре спектра) — у больных НСС и НСн/у. При этом для всех клинических групп больных НС было характерно наличие трех комбинаций антител: первая — Tp17,15, 47, TmpA; четвертая — Tp17, 15, 47; седьмая — Tp17) (n=41; 84%); для больных АНС и НСС также общей была комбинация Tp17,15, TmpA. В то же время два варианта комбинаций антител (вторая — Tp17, 47 TmpA; пятая — Tp17, 15) встречались только при АНС; первый вариант (Tp17, 47) — только при НСн/у. Однако ввиду малочисленности наблюдений в этих группах пациентов какие-либо выводы об ассоциациях комбинаций антител с определенной клинической формой НС пока делать преждевременно.

Нами были сопоставлены результаты тестирования семи образцов СМЖ больных НС классическими трепонемными методами, в которых отмечены отрицательные, слабоположительные или дискордантные результаты, с результатами их тестирования с помощью иммуночипа (табл. 7).

Как следует из приведенных данных табл. 7, при исследовании образцов с использованием иммуночипа, как правило, выявлялись антитела к антигену Tp17 (значения от 11,0 до 41,0 у.е.), и только в одном образце были выявлены антитела к антигенам Tp17 и Tp47 (значение 6,7 у.е.). Таким образом, использование технологии иммуночипов позволило подтвердить диагноз НС у данных пациентов, несмотря на разноречивые данные трепонемных тестов. Сравнение результатов исследования антител, определяемых в классических трепонемных тестах и в формате иммуночипа, показало, что в сомнительных случаях, при отрицательных, слабоположительных и дискордантных результатах тестирования ликвора классическими тестами метод иммуночипов может выступать в качестве арбитра.

Результаты сравнения диагностической чувствительности примененных в исследовании методов при тестировании образцов СМЖ пациентов с НС. На основании полученных данных нами были определены диагностические характеристики всех описанных методов тестирования образцов СМЖ больных НС (табл. 8).

Как следует из приведенных данных табл. 8, общеклинические тесты, используемые для диагностики НС, показали низкий уровень чувствительности как в целом по группе больных НС (цитоз — 27%, белок — 30,6%), так и по отдельным клиническим формам заболевания. Исключение составила лишь группа больных НС с клиническими проявлениями, в которой показатель уровня белка в СМЖ был повышен в 53% случаев.

В результате исследования было установлено, что нетрепонемные тесты, несмотря на их высокую специфичность при НС (100%), обладали низкой чувствительностью (суммарно по всем формам заболевания: РМП — 12,2%; VDRL — 38,8%). Однако VDRL при этом обладала в 3 раза более высокой чувствительностью в сравнении с РМП, превышая чувствительность РМП при диагностике АСС в 4 раза (16,7% против 4,1% положительных результатов) и при диагностике НСС — в 6 раз (70,6% против 11,8% положительных результатов). При диагностике НСн/у чувствительность обоих методов была одинаковой (по 37,5% положительных результатов).

Из числа трепонемных тестов наиболее высокую чувствительность при тестировании образцов СМЖ больных НС показали методы ИФА (98%), РИФ (100%) и технология иммуночипов (100%), как в целом по группе больных НС, так и по отдельным клиническим формам заболевания (у РИФц и иммуночипов чувствительность по всем формам заболевания составила 100%). Метод ИФА показал более низкую чувствительность у больных НС с клиническими симптомами (94,1%). Диагностическая специфичность ИФА и иммуночипов при тестировании образцов СМЖ лиц без НС составила 100%, диагностическая эффективность — 98,6 и 100% соответственно.

Менее чувствительными при тестировании образцов СМЖ больных НС оказались методы РПГА и РИБТ. Суммарно по всем клиническим формам НС чувствительность методов составила 89,8 и 81,6% соответственно. Наиболее высокая чувствительность РПГА и РИБТ была установлена у больных НС с клиническими симптомами (94,1 и 88,2% соответственно). Показатели диагностической спе-цифичности и эффективности для методов РПГА и РИБТ не определялись.

Результаты проведенных исследований показали, что поиск оптимальных методов и алгоритмов исследования спинномозговой жидкости для установления диагноза НС еще далек от своего завершения. Общеклинические тесты, такие как определение цитоза и белка в СМЖ, не являются специфичными для НС и дают приемлемый результат только при НС с клинически выраженными симптомами. Нетрепонемные и трепонемные тесты, широко применяемые для диагностики других клинических форм сифилиса и тестирования сыворотки крови больных НС, со СМЖ часто дают низкие показатели клинической чувствительности и спе-цифичности.

Исходя из результатов проведенного исследования, наиболее приемлемым нетрепонемным методом для ликворологической диагностики НС представляется VDRL, которая при 100% специфичности обладает в 3 раза более высокой чувствительностью в сравнении с методом РМП, превышая чувствительность РМП при диагностике АНС в 4 раза, а при диагностике НСС — в 6 раз. Таким образом, метод VDRL может и должен быть включен в число регламентированных методов диагностики НС.

Из числа трепонемных тестов наиболее высокая чувствительность при тестировании образцов СМЖ больных НС получена для методов ИФА (98%), РИФц (100%) и технологии иммуночипов (100%) как в целом по группе больных НС, так и по отдельным клиническим формам заболевания. При этом методы ИФА и иммуночипов обладают 100% спе-цифичностью.

Высокие показатели диагностической чувствительности и специфичности экспериментального иммуночипа при исследовании образцов сыворотки и СМЖ, полученных от пациентов с верифицированным НС, свидетельствуют о том, что иммуночип, содержащий четыре рекомбинантных антигена Treponema pallidum (Тр17, Тр15, Тр47, TmpA), может успешно применяться в клинической практике. При этом в образцах СМЖ пациентов с НС в 100% случаев выявляются антитела к белку-антигену Tp17, а антитела к двум и более антигенам в разных сочетаниях выявляются в 85,7% образцов. Взаимодействие антител, содержащихся в пробе биологического материала, полученной от пациента, одновременно с несколькими антигенами возбудителя в формате иммуночипа повышает точность диагностики и вследствие высокой емкости иммуночипа позволяет осуществлять одновременное обследование большого числа больных. Преимуществом диагностического теста в формате иммуночипа при выявлении антител против антигенов T. pallidum в сыворотке крови и СМЖ является возможность его применения как в скрининговых (сыворотка крови), так и в подтверждающих (сыворотка крови, СМЖ) иммунохимических исследованиях, что в перспективе может позволить значительно снизить стоимость лабораторной диагностики НС.

Конфликт интересов отсутствует.